мук по плавательным бассейнам
Мук по плавательным бассейнам
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Методы санитарно-паразитологического анализа воды
Дата введения: с момента утверждения
1. РАЗРАБОТАНЫ: Институтом медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского ММА им. И.М.Сеченова (Н.А.Романенко, А.И.Чернышенко, Г.И.Новосильцев, Е.Н.Морозов, Н.А.Турбабина); ФГУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора (А.И.Верещагин, И.В.Брагина, Т.Н.Цыбина, Т.Г.Сыскова, М.В.Зароченцев); кафедрой паразитологии, паразитарных и тропических болезней ММА им. И.М.Сеченова (В.П.Сергиев, Р.К.Мирзоева, М.В.Гузеева); ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в г.Москве» (Н.И.Тимошенко); ГНЦ РФ Физико-энергетический институт (Б.И.Фурсов, Г.С.Жданов); ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в г.Челябинске» (Б.Е.Рабинович); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Т.М.Гузеева, З.С.Середа); ГУ НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н.Сысина РАМН (Ю.А.Рахманин, Р.И.Михайлова, А.Е.Недачин); ФГУП НИИ физических проблем им. Ф.В.Лукина (С.М.Кузьмин, Е.С.Кузьмин, С.М.Безручко); Тюменским НИИ КИП (Т.Ф.Степанова); ООО «СтайЛаб» (А.В.Галкин); РМАПО Минсоцразвития России (А.Е.Беляев); РАГС при Президенте РФ (В.В.Гутенев); Курским Госуниверситетом (Н.С.Малышева, С.С.Пехова, Н.А.Плехова, Е.Л.Дмитриева); ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Белгородской области» (В.В.Евдокимов, В.И.Евдокимов).
2. РЕКОМЕНДОВАНЫ К УТВЕРЖДЕНИЮ Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 декабря 2007 г. N 3).
3. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г.Онищенко 18 января 2008 г.
4. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН МУК 4.2.964-00 «Санитарно-паразитологическое исследование воды хозяйственного и питьевого использования»
1. Область применения
1.1. Методические указания устанавливают методы лабораторного паразитологического контроля безопасности питьевой воды по нормируемым показателям СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества», СанПиН 2.1.4.1116-02 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды, расфасованной в емкости. Контроль качества», СанПиН 2.1.2.1188-03 «Плавательные бассейны. Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды. Контроль качества».
1.2. Настоящие методические указания являются обязательными для контроля питьевой воды по показателям паразитарной безопасности при проведении государственного санитарно-эпидемиологического надзора (контроля) в учреждениях Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека и лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке.
Допускается применение любого из указанных в настоящих МУК методов по выбору исполнителя.
Допускается использование аналогов оборудования, приборов, реагентов и материалов, указанных в настоящих МУК, разрешенных к применению в установленном порядке.
2. Отбор, хранение и транспортирование проб
2.1. Общие требования к отбору проб питьевой воды
Отбор проб воды на объектах надзора проводится в соответствии с действующими нормативно-методическими документами (СанПиН, ГОСТ, МУК) и настоящими методическими указаниями.
Для отбора проб воды используют специально предназначенную для этих целей одноразовую посуду или емкости многократного применения. Многоразовая посуда (емкости) должна быть изготовлена из материалов, выдерживающих обработку кипячением.
При исследовании воды из распределительной сети отбор проб производится из крана с предварительным спуском воды не менее 3-5 мин, с применением гибких шлангов, водораспределительных сеток, насадок. При отборе проб воды с концентрированием осадка на мембранных или порошковых фильтрах применяют насадки аппаратов напорного фильтрования, напор воды при этом регулируют с таким расчетом, чтобы он был достаточным для фильтрации через мембранные фильтры (МФАСП или ATM).
При исследовании воды на объектах транспорта (водном, воздушном, железнодорожном) отбор проб воды производится на выходе из гидротехнических сооружений, осуществляющих водоснабжение данных транспортных средств.
Из открытых (поверхностных) водоемов, плавательных бассейнов пробы отбирают с поверхности, с различных глубин объемом 25-50 л, емкостями 1,5-2,0 л с интервалом 2-3 мин.
Забор проб воды с объекта (точки пробозабора) проводят несколькими способами:
1) отбор воды с каждой точки пробозабора обследуемого объекта по 25-50 л непосредственно в большие закрывающиеся емкости (фляги, бутыли, канистры и т.п.) и соответственно доставкой этих объемов воды для исследования в лабораторию;
2) отбор воды (по 25-50 л с каждой точки) с последующим концентрированием проб с применением химреактивов (коагулянтов) непосредственно на обследуемом объекте и доставкой на исследование в лабораторию уменьшенного в 10 и более раз объема (осадок с надосадочной жидкостью);
3) отбор проб воды с помощью фильтровальных приборов на объектах водозабора и доставкой на исследование в лабораторию концентрированного осадка на мембранных или порошковых фильтрах.
2.2. Хранение и транспортирование проб
В лабораторию доставляют маркированные емкости с пробами исследуемой воды или осадок с надосадочной жидкостью после применения коагулянтов, или концентрированный осадок на фильтрах (мембранных или порошковых).
Фильтры, через которые проводилось фильтрование исходной воды с помощью фильтровальных приборов непосредственно на объекте надзора, помещают в широкогорлый флакон или стеклянную банку, добавляют исходной (исследуемой) воды с таким расчетом, чтобы вода покрывала поверхность фильтра, закрывают флакон или банку завинчивающейся или притертой крышкой и доставляют в лабораторию. При использовании фильтровальных приборов с порошковым фильтром в лабораторию доставляют концентрат пробы в пластиковой емкости, входящей в состав прибора.
Емкости с пробами воды, мембранными фильтрами с концентрированным осадком или с порошковым концентратом маркируют с указанием даты и номера пробы, количества мембранных фильтров с одной точки пробоотбора. Маркированные пробы в лабораторию транспортируют для дальнейшего исследования с сопроводительным актом отбора проб воды, где указывается место отбора (населенный пункт, водный объект и т.п.), дата, время забора, количество точек пробоотбора, номера проб, количество воды или количество фильтров и другая информация.
Пробы воды должны быть доставлены в лабораторию в течение 24 ч после отбора. Пробы, не прошедшие предварительную обработку, хранят при комнатной температуре 15-20 °С не более двух суток. Концентрированные пробы можно хранить в холодильнике при температуре 2-4 °С в течение не более трех суток.
3. Оборудование, расходные материалы, реактивы
3.1. Фильтровальное оборудование*
* Допускается применение аналогичных приборов отечественных и зарубежных производителей, разрешенных к применению в установленном порядке.
Приборы мембранного фильтрования:
1) вакуумные фильтровальные установки типа ПВФ-142, ПВФ-35, ПВФ-47;
2) напорного фильтрования типа ПНФ, УППВ.
Приборы порошкового фильтрования:
2) отборник флотанта фильтрующий типа «ОФФ-25».
3.2. Вспомогательное оборудование и расходные материалы
Лабораторная центрифуга типа ОПН-3, ОПН-8, ЦЛС-31М, ОС-6М со сменным ротором или другие марки с аналогичными параметрами, обеспечивающие 1500-3000 об./мин, позволяющие центрифугировать пробы воды в центрифужных пробирках объемом от 10 мл.
Низкотемпературный холодильный шкаф или холодильник бытовой, поддерживающий температуру 2-6 °С.
Термостат, поддерживающий рабочую температуру 37 °С и обеспечивающий градиент температуры в камере ±1 °С.
Весы лабораторные механические равноплечие (аптекарские) с наибольшим пределом взвешивания 1000 г, с допустимой погрешностью не более 0,1 г с разновесами или электронные с наибольшим пределом взвешивания 200 г, с допустимой погрешностью не более 0,01 г.
Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды не ниже ГОСТа 6709-72.
Шкаф сушильный, стерилизационный, обеспечивающий температуру до 180 °С.
Мембранные фильтры для фильтрования воды на основе ацетатов целлюлозы типа МФАС-СПА с размерами пор от 1,5 до 3,0 мкм, МФАС-СПА-4 с размерами пор от 2,5 до 4,5 мкм или прозрачные аналитические трековые мембраны ATM на основе полиэтилентерефталата с размерами пор от 1,0 до 5,0 и более мкм. Диаметр фильтровальных дисков 25, 35, 47, 70 и до 142 мкм, в зависимости от диаметра фритты фильтродержателя используемого фильтровального оборудования.
Емкости для отбора проб воды из нейтрального материала, пригодные для обеззараживания (широкогорлые стеклянные или пластиковые флаконы емкостью 100-500 мл с притертым или завинчивающимися крышками, металлические или пластиковые канистры емкостью 10-25 л, стеклянные бутыли, фляги молочные металлические, эмалированные бидоны и др.).
Дозаторы пипеточные полуавтоматические с наконечниками.
Лабораторный вортекс, лабораторный ротатор.
Лабораторная посуда стеклянная одноразового или многоразового использования (химические стаканы, колбы, чашки Петри, цилиндры измерительные, пробирки центрифужные градуированные, микропробирки полипропиленовые, стеклянные палочки, стекла предметные, стекла покровные, пипетки стеклянные или разовые и т.п.).
Инструментарий металлический: пинцеты для работы с мембранными фильтрами, ножницы, иглы препаровальные, шпатели.
Лотки эмалированные, металлические, эмалированные кастрюли, ведра.
Горелки газовые или спиртовки.
Штативы лабораторные для пробирок и микропробирок.
Часы песочные на 3-5 мин, часы сигнальные или электронный таймер.
Кисти акварельные широкие (мягкие или полужесткие).
4. Методы концентрирования проб питьевой воды
Концентрация больших объемов воды (50 л и более) на объектах позволяет пробу воды, предназначенную для доставки в лабораторию на исследование, уменьшить до 0,5-1,0 л.
Концентрирование больших объемов воды применимо также непосредственно в лабораториях, что позволяет не только уменьшить объемы исследуемых проб воды, но и хранить пробы перед исследованием в холодильнике до 3-х суток (п.2.2).
Все пробы воды, которые сконцентрированы с применением химических реактивов (коагулянтов), исследуются после предварительной фильтрации через мембранные фильтры.
4.1. Концентрирование проб воды с применением химических веществ
4.1.1. Концентрирование пробы воды гидрокарбонатом кальция
Добавить 100 мл 1 моль/л NaOH. Встряхнуть емкость для перемешивания.
Дать отстояться не менее 2 ч.
После осаждения хлопьев осторожно удалить из емкости надосадочную жидкость, оставив 4-5 см жидкости над осадком (даже если осадок невидим).
В осадок с надосадочной жидкостью добавить 100-200 мл 10%-ной сульфаминовой кислоты (NH SO H) для полного растворения хлопьев.
Хорошо перемешать содержимое емкости и перелить в центрифужные флаконы объемом 1000 мл или 500 мл, пронумерованные в соответствии с номером пробы.
Вода во флаконах должна иметь рН=6±0,5, чтобы не было повторного образования хлопьев. При несоответствии рН осторожно отрегулировать раствором 1 моль/л NaOH.
Центрифугировать флаконы 10 мин при 1500-2000 об./мин.
Сразу после центрифугирования осторожно удалить (слить) надосадочную жидкость или отсосать лабораторным вакуумным насосом с давлением не более 0,2 бар.
Энергично перемешать оставшуюся жидкость, ресуспендируя осадок, и перенести его в градуированную центрифужную пробирку объемом 50 мл.
Довести объем в ней до 50 мл фильтрованной дистиллированной водой (сполоснуть центрифужный флакон дистиллированной водой и перенести в 50 мл центрифужную пробирку).
Центрифугировать пробирки 15 мин при 2000-2500 об./мин.
Записать объем осадка сразу после центрифугирования.
Удалить надосадочную жидкость или отсосать пипетками, оставив 1 см над осадком.
Добавить дистиллированную воду в центрифужную пробирку, доведя объем до 5 мл.
«МУК 4.2.2029-05. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Санитарно-вирусологический контроль водных объектов. Методические указания» (утв. Роспотребнадзором 18.11.2005)
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
18 ноября 2005 года
с момента утверждения
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
САНИТАРНО-ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ ВОДНЫХ ОБЪЕКТОВ
1. Разработаны: ГУ НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина РАМН (А.Е. Недачин, Р.А. Дмитриева, Т.В. Доскина, Д.В. Лаврова, А.Г. Санамян); ГУ НИИ полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН (О.Е. Иванова, Т.П. Еремеева); ГУ Центральный НИИ эпидемиологии (Г.А. Шипулин, В.П. Чуланов, Е.Н. Родионова, А.Т. Подколзин); ГУ Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера (В.В. Малышев, М.А. Бичурина, Н.В. Железнова); Санкт-Петербургской Военно-медицинской академией им. С.М. Кирова (П.И. Огарков); Белорусским НИИ эпидемиологии и микробиологии (Т.В. Амвросьева).
В подготовке материалов принимали участие: ФГУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора (Т.В. Воронцова); Аналитический Центр ЗАО «РОСА» (В.Б. Конторович); Нижегородский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. И.Н. Блохиной (К.В. Блохин, М.И. Попкова); ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в г. Москве» (С.Г. Курибко, Г.М. Бабкина); ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Вологодской области» (И.Р. Лесников); ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Воронежской области» (О.Т. Агеева); ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Оренбургской области» (В.О. Скворцов); ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии во Владимирской области» (Н.И. Джакаридзе); ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Ленинградской области» (Э.В. Маликова); ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Калужской области» (Е.И. Косолапова); Территориальное управление Роспотребнадзора по Липецкой области (И.А. Ходякова); ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в г. Ростове-на-Дону» (Т.А. Зыкова).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 6 октября 2005 года (протокол N 3).
3. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 18 ноября 2005 года.
1. Область применения
1.1. Методические указания устанавливают методы санитарно-вирусологического контроля качества воды различного вида водопользования и степени загрязнения в отношении ее эпидемической безопасности по санитарно-вирусологическим показателям, регламентируемым СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества»; СанПиН 2.1.5.980-00 «Гигиенические требования к охране поверхностных вод»; СанПиН 2.1.4.1175-02 «Гигиенические требования к качеству воды нецентрализованного водоснабжения. Санитарная охрана источников»; СанПиН 2.1.2.1188-03 «Плавательные бассейны. Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды. Контроль качества»; СанПиН 2.1.4.1116-02 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды, расфасованной в емкости. Контроль качества».
1.2. Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор за качеством питьевой воды, состоянием водоемов в местах водопользования населения, использованием сточных вод в системах промышленного оборотного водоснабжения и для орошения сельскохозяйственных угодий.
1.3. Методические указания также могут использоваться организациями, эксплуатирующими системы централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения, системы канализования и осуществляющими производственный контроль.
2. Гигиенические и эпидемиологические показания
к проведению санитарно-вирусологического контроля качества
2.1. Виды санитарно-вирусологического контроля
В системе государственного санитарно-эпидемиологического надзора за загрязнением кишечными вирусами водных объектов используют следующие виды санитарно-вирусологического контроля:
Плановый санитарно-вирусологический контроль осуществляют в течение года в соответствии с разработанной программой для каждой системы водоснабжения на конкретной территории, согласованной с территориальными органами Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
При обнаружении колифагов либо вирусных антигенов (ВГА, ротавирусов) в исследуемых пробах необходимо исследовать воду на наличие энтеровирусов, а также РНК энтеровирусов, РВ и ВГА методом ОТ-ПЦР.
Внеплановый санитарно-вирусологический контроль предусматривает проведение исследований воды на наличие колифагов, антигенов ротавирусов и ВГА и энтеровирусов в случае внезапных или непредвиденных изменений санитарно-эпидемической ситуации на контролируемой территории:
— каких-либо аварий или нарушений в системах водоснабжения и канализации, в результате которых может произойти массивное микробное загрязнение поверхностных и подземных водоисточников, а также питьевой воды. В этот период все работы заинтересованных организаций, включая и санитарно-вирусологический контроль, координирует Чрезвычайная противоэпидемическая комиссия города, района, субъекта Российской Федерации;
— по санитарно-эпидемиологическим показаниям контроль осуществляют в случае наличия факторов-предшественников в санитарно-эпидемиологической ситуации на территории и последующего подъема заболеваемости населения кишечными вирусными инфекциями, которая превышает уровень круглогодичной заболеваемости, характерной для конкретной местности.
Санитарно-вирусологический контроль в период эпидемического риска предусматривает более частые исследования по сравнению с установленными в программе текущего контроля, его утверждает главный государственный санитарный врач города, района, субъекта Российской Федерации либо его проводят по решению Чрезвычайной противоэпидемической комиссии города, района, субъекта Российской Федерации.
Производственный санитарно-вирусологический контроль проводят постоянно, он предусматривает исследования воды водных объектов в организациях водоснабжения: на этапах водоподготовки, выходе с водоочистных сооружений (после обеззараживания), в разводящей сети; в организациях по производству воды, расфасованной в емкости; при выборе водоисточника; при оценке эффективности работы обеззараживающих установок, режима их работы; при превышении нормативов уровня колифагов либо при обнаружении антигенов ВГА и (или) ротавирусов.
Определение энтеровирусов и (или) РНК РВ и ВГА проводят в санитарно-вирусологических лабораториях, обеспечивающих деятельность государственного санитарно-эпидемиологического надзора, профильных учреждений и других организаций, имеющих разрешение на данный вид деятельности в установленном законодательством Российской Федерации порядке.
2.2. Объекты исследования
Объектами исследования является вода различных водных объектов:
— сточная на этапах очистки и обеззараживания;
— пресных и морских поверхностных водоемов, используемых в рекреационных целях, а также в качестве источников хозяйственно-питьевого водоснабжения;
— питьевая (водопроводная; вода, расфасованная в емкости и др.);
— из децентрализованных водоисточников.
Сточные воды, поступающие на очистные сооружения, исследуют с целью изучения спектра энтеровирусов, циркулирующих среди населения, и по эпидемическим показаниям.
Сточные воды на этапах очистки и обеззараживания исследуют для изучения эффективности работы очистных сооружений в отношении возбудителей кишечных вирусных инфекций в соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами и нормативами СанПиН 2.1.5.980-00 «Гигиенические требования к охране поверхностных вод».
2.2.2. Вода поверхностных водоемов.
Воду пресных водоемов исследуют на наличие вирусного загрязнения с целью изучения процессов самоочищения, при выборе поверхностных водоемов в качестве водоисточников для централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения, установления зон санитарной охраны, по эпидемическим показаниям.
Контроль воды морских и пресных водоемов за уровнем загрязнения осуществляют при использовании их в рекреационных целях в соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами и нормативами СанПиН 2.1.5.980-00 «Гигиенические требования к охране поверхностных вод», по эпидемическим показаниям.
2.2.3. Вода подземных водоисточников.
Воду подземных водоисточников исследуют на наличие вирусного загрязнения при выборе источника хозяйственно-питьевого водоснабжения, контроле ее качества в соответствии с ГОСТ 2761-84 «Источники централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения», по эпидемическим показаниям.
2.2.4. Вода плавательных бассейнов и аквапарков.
Контроль за уровнем вирусного загрязнения воды плавательных бассейнов проводят в соответствии с требованиями санитарно-эпидемиологических правил и нормативов СанПиН 2.1.2.1188-03 «Плавательные бассейны. Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды. Контроль качества», СанПиН 2.1.2.1331-03 «Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству вод аквапарков», по эпидемическим показаниям.
Питьевую воду исследуют на наличие вирусного загрязнения в соответствии с требованиями санитарно-эпидемиологических правил и нормативов СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества», СанПиН 2.1.4.1116-02 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды, расфасованной в емкости. Контроль качества», в соответствии с программой исследования воды, утвержденной главным государственным санитарным врачом города, района, субъекта Российской Федерации, по эпидемическим показаниям.
2.2.6. Контроль воды децентрализованных источников.
Исследование воды децентрализованных источников проводят в соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами и нормативами СанПиН 2.1.4.1175-02 «Гигиенические требования к качеству воды нецентрализованного водоснабжения. Санитарная охрана водоисточников», по эпидемическим показаниям.
2.3. Санитарно-вирусологические показатели качества водных объектов
Санитарно-вирусологический контроль воды водных объектов предусматривает исследования по следующим показателям:
— кишечные вирусы (энтеровирусы и аденовирусы в культурах ткани);
— антигены ротавирусов и вируса гепатита А в качестве маркеров вирусного загрязнения;
— РНК вирусов гепатита А, ротавирусов, энтеровирусов и ДНК аденовирусов методом полимеразной цепной реакции со стадией обратной транскрипции (ОТ-ПЦР) для РНК-содержащих вирусов;
— колифаги (исследования проводят бактериологические лаборатории) в качестве косвенных показателей вирусного загрязнения вод различного назначения в соответствии с нормативными и методическими документами.
Выбор показателей осуществляют в соответствии с нормативными и методическими документами или по рекомендациям эпидемиолога.
2.4. Оценка эпидемической безопасности водных объектов
Вода водных объектов и питьевая вода подлежат обязательному санитарно-вирусологическому контролю.
Основным принципом регламентирования вирусного загрязнения воды на настоящем этапе является отсутствие возбудителей кишечных вирусных инфекций в нормируемом объеме воды водных объектов и питьевой воде.
Критерием эпидемической безопасности воды водных объектов является отсутствие спорадической и вспышечной заболеваемости населения, обусловленной кишечными вирусами, распространяющимися водным путем.
В соответствии с результатами исследований воды на колифаги проводят обязательное прямое определение энтеровирусов и аденовирусов с использованием «культуральных» методов.
Подтверждением этому является развитие соответствующей эпидемической ситуации на изучаемой территории, а также гомологичность РНК вирусов, выделенных из воды и из материалов от больных.
Для получения информации о степени гомологии штаммов вирусов, выделенных из воды и из материалов от больных на исследуемой территории, проводят ПЦР-амплификацию вариабельного фрагмента генома вируса с последующим секвенированием. Полная гомология данных фрагментов генома свидетельствует в пользу водного пути распространения возбудителя, тогда как наличие генетических отличий исключает роль водного фактора в возникновении данной эпидемической вспышки (эти исследования выполняют в специализированных лабораториях, имеющих разрешение на данный вид деятельности в установленном законодательством Российской Федерации порядке).
3. Основные материалы, оборудование, питательные среды
Примечание. Могут использоваться материалы, оборудование, питательные среды, тест-системы с аналогичными характеристиками, разрешенные к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном законодательством порядке.
4. Общие правила отбора проб из различных водных объектов
Для отбора проб воды используют специально предназначенную для этих целей одноразовую посуду или стерильные емкости многократного применения, изготовленные из материалов, не оказывающих инактивирующего действия на вирусы. Емкости должны быть оснащены плотно закрывающимися пробками (силиконовыми, резиновыми или из других материалов) и защитным колпачком (из алюминиевой фольги, плотной бумаги). Емкость открывают непосредственно перед отбором, удаляя пробку вместе со стерильным колпачком. Во время отбора пробка и края емкости не должны чего-либо касаться. Ополаскивать посуду не допускается. При исследовании воды из распределительных сетей отбор проб из крана производят после его предварительной стерилизации обжиганием и последующего спуска воды не менее 10 мин. при полностью открытом кране. При отборе пробы напор воды может быть уменьшен. Пробу отбирают непосредственно из крана без резиновых шлангов, водораспределительных сеток и других насадок. Если через пробоотборный кран вода течет постоянно, отбор проб производят без предварительного обжига, не изменяя напора воды и существующей конструкции (при наличии силиконовых или резиновых шлангов).
Если отбирают пробу после обеззараживания химическими реагентами, то для нейтрализации остаточного количества хлорсодержащих дезинфектантов в емкость, предназначенную для отбора проб, вносят до стерилизации натрий серноватистокислый в виде кристаллов или концентрированного раствора из расчета 10 мг на 500 мл воды. После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой и колпачком. При отборе проб в одной и той же точке для различных целей, первыми отбирают пробы для бактериологических исследований.
Отобранную пробу маркируют и сопровождают актом отбора проб воды с указанием места, даты, времени отбора и другой необходимой информации.
К исследованию проб воды необходимо приступить сразу же после доставки проб в лабораторию.
5. Методы концентрирования вирусов из воды
В данном разделе представлены современные методы концентрирования вирусов из воды, предназначенные для качественной или количественной оценки вирусного загрязнения. Перечень методов и область применения представлены в табл. 1.
ОБЪЕМ ПРОБ, УСЛОВИЯ И ПЕРИОДИЧНОСТЬ ОТБОРА ПРОБ ВОДЫ ВОДНЫХ
ОБЪЕКТОВ НА ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ
Выбор того или иного метода в практике контроля вирусного загрязнения определяют эпидемической ситуацией в регионе, задачами региональных планов по снижению заболеваемости кишечными вирусными инфекциями, уровнем оснащенности лабораторий.
5.1. Метод концентрирования вирусов с использованием фильтрующих мембран
5.1.1. Область применения.
5.1.2. Подготовка мембранных фильтров.
Фильтрующие мембраны должны быть подготовлены к анализу в соответствии с указаниями организации-изготовителя (листовка-аннотация, сопровождающая фильтры). Перед исследованием фильтрующие мембраны смачивают стерильной водопроводной водой в стерильной емкости.
5.1.3. Подготовка фильтровального аппарата.
Для фильтрования исследуемой воды используют установку, например, типа АФ-142 «К» или другую с аналогичными характеристиками, которая состоит из фильтродержателя, емкости на 10 и более литров для исследуемой воды и ее последующей фильтрации и устройства, нагнетающего жидкость.
Перед фильтрацией фильтродержатель протирают ватным тампоном, смоченным спиртом ректификованным 70%, и обжигают. После охлаждения на нижнюю часть фильтродержателя кладут стерильным пинцетом влажный мембранный фильтр, предварительно смоченный в стерильной водопроводной воде. Затем фильтр прижимают верхней частью фильтродержателя и закрепляют зажимами, равномерно завинчивая последние со всех сторон.
5.1.4. Фильтрование воды.
5.1.5. Элюция сконцентрированных вирусных частиц.
5.1.6. Обработка проб.
Для удаления бактериальной микрофлоры элюат подвергают обработке одним из двух методов: обработкой хлороформом или фильтрацией через стерилизующие мембраны.
5.1.6.1. При использовании хлороформа его добавляют в элюат (1 мл на 10 мл элюата), интенсивно встряхивают 10 мин. и центрифугируют 10 мин. при 2000 об./мин. для разделения фаз. Водную фазу (верхнюю) аккуратно отбирают пипеткой в стерильный флакон, добавляют 100 МЕ/мл пенициллина и 10,0 мг/мл стрептомицина.
5.2. Метод концентрирования вирусов с использованием ионообменных смол
5.2.1. Область применения.
Метод рекомендуется для концентрирования вирусов из чистых вод, воды поверхностных водоемов и сточных вод. Объем проб для исследования определенного вида воды представлен в табл. 1.
5.2.2. Подготовка ионообменной смолы.
5.2.3. Концентрирования вирусов из проб воды.
5.2.4. Элюция вирусов с ионообменной смолы
Приготовление 0,5 М фосфатного буфера с рН 8,2.
5.2.5. Обработка проб (см. п. 5.1.6).
5.2.6. Хранение проб (см. п. 5.1.7).
5.3. Двухэтапный метод концентрирования вирусов (сорбция на ионообменной смоле и осаждение с помощью сульфата аммония)
5.3.1. Область применения.
Метод рекомендуется для концентрирования вируса гепатита А и энтеровирусов из проб питьевой воды и воды водоисточников. Объем проб может колебаться от 10 до 50 л.
5.3.2. I этап. Концентрирование и элюция вируса гепатита А и энтеровирусов из проб воды при помощи сорбции на ионообменной смоле.
Приготовление глицинового буфера с рН 11,5.
Навеску 0,385 г аминоуксусной кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды и получают глицин. К 50 мл глицина добавляют 50 мл 0,1 N раствора гидроксида натрия и получают глициновый буфер с рН 11,5.
5.3.4. Хранение проб (см. п. 5.1.7).
5.4. Метод концентрирования вирусов с использованием двухфазного разделения
Метод рекомендован Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) «Рекомендации по надзору за вирусом полиомиелита в окружающей среде», ВОЗ, 2003.
5.4.1. Область применения.
Метод концентрирования двухфазным разделением используют для индикации вирусов из 1 л очищенных и неочищенных сточных вод.
5.4.2. Подготовка реактивов (для 2-х проб по 1 л).
5.4.2.3. 150 мл (примерно) 5 М NaCl.
5.4.2.4. 1 N NaOH и 1 N HCL для установки рН.
5.4.3. Концентрирование пробы по 0,5 л.
5.4.3.1. Пробу центрифугируют в течение 10 мин. при 1000 g. Надосадочную жидкость переносят из пробирок в колбу Эрленмейра емкостью 1 л, осадок хранят при 4 °С.
5.4.3.3. К 500 мл надосадочной жидкости добавляют 39,5 мл 22% раствора декстрана, 287 мл 29% раствора ПЭГ 6000 и 35 мл 5 N раствора NaCl. Тщательно перемешивают и выдерживают 1 ч при температуре 4 °С при непрерывном встряхивании или перемешивании, используя прибор горизонтального встряхивания или магнитную мешалку.
5.4.3.4. Для каждой пробы подготавливают стерильную коническую делительную воронку и закрепляют ее в штативе. Смазывают скользящие поверхности кранов, но так, чтобы не закрыть в них отверстие. Проверяют плотность кранов небольшим количеством воды. Смесь, приготовленную по п. 5.4.3.3, переливают в воронку и оставляют на ночь при 4 °С.
5.4.3.6. В полученную жидкость (п. 5.4.3.5) вносят осадок (п. 5.4.3.1), добавляют хлороформ (20% от объема образовавшейся взвеси) и встряхивают в течение 1 мин. Центрифугируют, отбирают верхнюю водную фазу в стерильную пробирку и добавляют антибиотики (пенициллин G или отечественный аналог и стрептомицин до конечной концентрации 100 МЕ/мл и 100 мг/мл соответственно).
5.5. Метод концентрирования вирусов с помощью флизелиновых пакетов с макропористым стеклом
5.5.1. Область применения.
Можно использовать готовые стандартные наборы, разрешенные к применению в Российской Федерации в установленном законодательством порядке.
В пакет из флизелина размером 5 х 7 см помещают 3,0 см подготовленного сорбента.
5.5.3. Концентрирование вирусов.
5.5.4. Элюция вирусов с МПС.
5.5.5. Обработка проб (см. п. 5.1.6).
5.5.6. Хранение проб (см. п. 5.1.7).
5.6. Метод концентрирования вирусов с использованием набора для сбора и концентрирования вирусов из питьевой воды с помощью ловушечного устройства.
Ловушечное устройство состоит из насадки на водопроводный кран, к которой с помощью синтетической трубки прикреплен держатель. В держатель, состоящий из двух свинчивающихся частей с резьбой, вставляется специальная ловушка, внутри которой находится адсорбент, сорбирующий вирусы из воды. Применяемая ловушка является одноразовой, а само устройство может использоваться после стерилизации многократно в соответствии с прилагаемой инструкцией.
5.6.1. Область применения.
Метод используют для концентрирования вирусов из водопроводной воды.
5.6.2. Подготовка ловушечного устройства и фильтрование воды.
5.6.3. Элюция сконцентрированных вирусных частиц.
Использованный адсорбент заливают 3% раствором перекиси водорода для обеззараживания на 12 ч.
С целью увеличения эффективности обнаружения вирусов в элюатах проб воды при исследовании методом ПЦР (обнаружение РНК энтеровирусов) и ИФА (обнаружение антигенов энтеровирусов) проводят дополнительное концентрирование элюатов с помощью ультрацентрифугирования либо обрабатывают элюаты полиэтиленгликолем 6000 (ПЭГ 6000).
5.6.3.1. Ультрацентрифугирование элюата.
5.6.3.2. Обработка элюата полиэтиленгликолем 6000 (ПЭГ 6000).
5.6.4. Обработка проб (п. 5.1.6).
6. Методы выделения энтеровирусов в культурах клеток
Исследование полученных элюатов на энтеровирусы проводят в культуре ткани в соответствии с документом «Руководство по вирусологическим исследованиям полиомиелита», рекомендованным Всемирной организацией здравоохранения (1998). При этом следует отметить, что для выделения вирусов используют максимально возможный полученный элюат (кроме 1 мл, заложенного на хранение, и объема, используемого для исследования в ИФА и ПЦР). Для выделения вирусов используют следующие культуры тканей: RD, Hep-2, BGM и другие чувствительные к энтеровирусам линии клеток.
Перевиваемые культуры клеток RD, Hep-2 (Cincinnatti), BGM наиболее пригодны для проведения лабораторных исследований и позволяют выделять достаточно широкий спектр энтеровирусов, которые могут присутствовать в водных объектах окружающей среды.
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КУЛЬТУР КЛЕТОК
К РАЗЛИЧНЫМ ЭНТЕРОВИРУСАМ
При хорошем состоянии культуры клеток первичное заражение и один пассаж вместе составляют период наблюдения 14 дней. В ряде случаев (например, при выделении агента с низкой цитопатогенной активностью, или при наличии в пробе вируса в небольшом количестве) необходимо сделать последующие пассажи. При этом следует помнить, что каждый последующий пассаж увеличивает риск перекрестной контаминации.
Особое внимание следует уделять предупреждению перекрестной вирусной контаминации во время процедур заражения и пассирования. Нельзя сливать среду через край флакона или пробирки, в которые вносилась исследуемая проба, даже если ЦПЭ отсутствует. Удаление среды производят пипеткой, которую меняют после каждой процедуры. При заражении с помощью автоматических микропипеток используют только наконечники с фильтрами. Следует избегать процедур, при которых образуются аэрозоли (например, энергичное пипетирование); по возможности не рекомендуется использование посуды с резиновыми пробками, которые помещаются внутрь горлышка флакона или пробирки, целесообразно использовать посуду с внешней резьбой на горлышке, которая закрывается завинчивающимися крышками.
Известно, что в пробах воды присутствуют смеси вирусов, с чем могут быть связаны затруднения при идентификации выделенных изолятов. Для разделения смесей и правильной идентификации выделенных вирусов, а также для того, чтобы избежать потери вирусов полиомиелита, все изоляты, «положительные» на культуре клеток RD, следует пассировать на клетки L20B. Наличие выраженного ЦПЭ указывает на присутствие в пробе вируса полиомиелита. Некоторые реовирусы, аденовирусы, а также неполио-энтеровирусы могут проявлять ЦПЭ на клетках L20B и затруднять идентификацию выделенных изолятов и интерпретацию результатов исследования. Такие изоляты следует направить в соответствующую референс-лабораторию для заключительного исследования.
7. Идентификация цитопатических агентов, выделенных
в реакции нейтрализации
Реакцию нейтрализации проводят в панелях для культуры клеток с плоским дном (микрометод). Микрометод позволяет экономить все компоненты, необходимые для постановки опыта, однако при недостаточном опыте возникает опасность перекрестной лабораторной контаминации.
Титрование вирусов, а также постановку реакции нейтрализации выполняют в соответствии с документом «Руководство по вирусологическим исследованиям полиомиелита».
8. Выявление РНК кишечных вирусов (вируса гепатита А,
ротавирусов, энтеровирусов) методом полимеразной цепной
реакции с этапом обратной транскрипции
Организация и постановка полимеразной цепной реакции с этапом обратной транскрипции (ОТ-ПЦР) для выявления РНК энтеровирусов, ротавирусов и вируса гепатита А из концентратов проб воды поверхностных, подземных источников, питьевой и сточных вод может быть осуществлена в лабораториях, оснащенных необходимым оборудованием.
8.1. Меры предосторожности и правила работы при постановке полимеразной цепной реакции с этапом обратной транскрипции
Организацию работы в ПЦР-лаборатории осуществляют в соответствии с документом «Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции», утв. Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора Российской Федерации 22 июня 1995 года.
8.1.1. Лабораторию разделяют на зоны (комнаты) для каждой из стадий ПЦР-диагностики.
Следует иметь не менее двух комнат:
— пре-ПЦР-помещение, где проводят обработку образцов из объектов окружающей среды (элюаты), выделение нуклеиновых кислот, приготовление реакционной смеси для ПЦР и постановку ПЦР (при наличии условий два последних этапа рекомендуется также проводить в дополнительном отдельном помещении). В этих помещениях не допускается проводить все другие виды работ с инфекционными агентами (микробиологический анализ, ИФА, другие диагностические тесты и т.д.), ПЦР-диагностику которых проводят в данной лаборатории;
— пост-ПЦР-помещение, где проводят детекцию продуктов амплицификации. В пост-ПЦР-помещении допускается использовать другие методы детекции инфекций, диагностика которых проводится в данной лаборатории.
8.1.2. Помещение для детекции продуктов амплификации (пост-ПЦР-помещение) располагают как можно дальше от пре-ПЦР-помещений,
8.1.3. Работу в лаборатории организовывают в одном направлении: от пре-ПЦР-помещений к пост-ПЦР-помещению.
8.1.5. Используют одноразовую пластиковую посуду.
8.1.6. Работают в одноразовых перчатках.
8.1.7. Перчатки и халаты меняют при переходе из одной зоны в другую.
8.1.8. Поверхности столов, а также помещения, в которых проводят постановку ПЦР, до начала и после окончания работ обеззараживают ультрафиолетовым излучением.
8.1.9. Для работы в ПЦР-лаборатории допускается персонал, прошедший специальную подготовку.
8.2. Меры предосторожности и правила работы при постановке электрофореза
Реагент бромистый этидий является сильным мутагеном, поэтому все манипуляции проводят с использованием перчаток. Все реагенты, содержащие бромистый этидий, перед утилизацией подвергают специальной обработке.
8.3. Контроль полимеразной цепной реакции
Положительный (ПКО) и отрицательный (ОКО) контрольные образцы используют для контроля специфичности ПЦР. В качестве ПКО используют любой штамм энтеровирусов, ротавирусов и вируса гепатита А для выявления соответствующих возбудителей. В качестве ОКО используют стерильную воду, не содержащую вирусной РНК.
8.4. Выявление РНК ротавирусов и вируса гепатита А
Метод ОТ-ПЦР используют для выявления РНК вирусных агентов в исследуемых пробах воды. Исследованию подлежат элюаты проб питьевой воды, воды подземных водоисточников, речной и сточных вод. Для выделения РНК из концентратов проб питьевой воды и воды подземных водоисточников применяют метод афинной сорбции РНК на частицах силикагеля в соответствии с документом «Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции», утв. Госкомсанэпиднадзором 22 июня 1995 года (для выделения РНК рекомендуется использовать готовые комплекты, например, типа «Амплисенс» и др.).
Для выделения РНК из концентратов проб воды поверхностных водоисточников и сточных вод необходимо применять метод двустадийного выделения :
— сорбция РНК на частицы силикагеля.
8.5. Постановка реакции обратной транскрипции, проведение полимеразной цепной реакции и электрофоретический анализ продуктов полимеразной цепной реакции с этапом обратной транскрипции-амплификации (ОТ-ПЦР-амплификации)
Рекомендуется использовать ПЦР-тест-системы на вирус гепатита А и ротавирусы с электрофорезом в агарозном геле (кат. N V4-50-R0,5; V4-50-R0,2; V15-50-R0,5; 15-50-R0,2), разрешенные к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном законодательством порядке.
8.6. Обнаружение энтеровирусов методом полимеразной цепной реакции с этапом обратной транскрипции (ОТ-ПЦР) с использованием культуры ткани для выявления репликативной «минус» нити РНК энтеровирусов
Для подтверждения инфекционности выделенных энтеровирусов проводят первичное заражение элюатом культуры клеток, через двое суток после культивирования зараженных клеток проводят ОТ-ПЦР с культуральной жидкостью при наличии ЦПД или с лизатом клеток культур тканей при отсутствии ЦПД. Суть методики состоит в выявлении с помощью ПЦР негативной минус цепи («-» цепи) РНК энтеровирусов после их культивирования в культуре ткани. Негативная цепь является промежуточным продуктом репликации вируса, и ее обнаружение служит косвенным доказательством потенциальной инфекционности вируса.
8.6.1. Заражение культур клеток и их последующая обработка.
Инкубируют зараженные клетки в течение 5 суток, микроскопируя их ежедневно для контроля начала цитопатического действия. При первых признаках деградации культуры (но не позднее 5-х суток) пробирки извлекают из термостата, удаляют из них культуральную среду и промывают физраствором (или раствором Хенкса). После промывки тщательно (пипеткой) удаляют из пробирок остатки промывной жидкости.
8.6.3. Обратная транскрипция.
8.6.3.1. Праймерные последовательности.
Праймерные последовательности можно синтезировать под заказ в организациях-производителях. Для постановки ИКК-ПЦР необходимо специально синтезировать 1 энтеровирусспецифический праймер, используемый на стадии обратной транскрипции (последовательность указана в табл. 3).
Праймеры, необходимые для проведения ПЦР, входят в состав готовой стандартной тест-системы.
8.6.3.2. Расчет рабочих концентраций праймеров.
Поставку праймеров производителем осуществляют в количествах, измеряющихся в оптических единицах (ОЕ) на мл. Для расчета рабочих концентраций праймеров необходимо перевести ОЕ в мкМ. Для праймера длиной А пар нуклеотидов (п.н.), поставляемом в количестве В ОЕ, пересчет осуществляют следующим образом:
— определяют молекулярную массу (ММ) одноцепочечной ДНК (оцДНК) по формуле:
ММ = 330 дальтон (ММ 1 п.н.) х А;
— определяют концентрацию праймера, исходя из того, что 1 ОЕ оцДНК соответствует концентрации 37 мкг/мл, соответственно В ОЕ соответствуют концентрации 37 х В мкг/мл;
— определяют концентрацию праймера С в мкМ:
С = (37 х В х 1000) / (330 х А) (мкМ).
8.6.3.3. Постановка реакции обратной транскрипции.
— смесь аккуратно перемешивают, осаждают центрифугированием (5 с при 5000 об./мин. или с использованием вортекса) и помещают в термоциклер на 70 °С 10 мин.;
— по истечении времени нагревания пробирки достают и помещают на лед;
После синтеза кДНК на РНК матрице пробы используют для ПЦР-амплификации.
8.6.3.4. Полимеразная цепная реакция.
Амплификацию полученной в реакции обратной транскрипции кДНК осуществляют с использованием тест-системы для амплификации участка кДНК энтеровирусов длиной 207 п.н. (кат. N V-16-100-R0,5 или кат. N V-16-100-R0,2) в соответствии с прилагаемой инструкцией.
8.6.4. Анализ амплифицированной ДНК, учет результатов.
Для анализа амплифицированной ДНК используют разные методы, наиболее простым из которых является гель-электрофорез. Для постановки электрофореза можно использовать комплект стандартных реагентов для электрофореза в агарозном геле (кат. N К5-200) в соответствии с инструкцией производителя.
Учет результатов проводят визуально с помощью трансиллюминатора. При этом агарозный гель либо достают из кюветы и помещают на стекло трансиллюминатора, либо используют емкости из УФ-проницаемых материалов.
При постановке ОТ-ПЦР для выявления в пробе «минус» цепи РНК энтеровирусов, положительные образцы должны содержать полосу ДНК размером 207 п.н. Размер полосы определяют по соотношению с положительным контролем и ДНК-маркером. Результаты можно документировать посредством фотографирования или видеосъемки геля с использованием ультрафиолетовых фильтров.
8.6.5. Интерпретация результатов, полученных с использованием культур тканей методом ОТ-ПЦР.
Выявление негативной РНК («минус» цепи РНК) энтеровирусов в пробе исследуемой воды с помощью ОТ-ПЦР зараженных культур клеток свидетельствует о присутствии в ней инфекционных энтеровирусов и интерпретируется как положительный результат молекулярного теста на инфекционность энтеровирусов.
9. Определение вирусных антигенов ротавирусов и вирусного
гепатита А в иммуноферментном анализе
Элюаты, полученные после концентрирования исследуемых объемов воды, анализируют методом иммуноферментного анализа (ИФА) в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к готовому стандартному диагностическому набору.
10. Библиографические данные
1. Закон Российской Федерации от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Закон Российской Федерации от 19 декабря 1991 г. N 96-ФЗ «Об охране окружающей среды».
3. Водный кодекс Российской Федерации от 16 ноября 1995 г. N 167-ФЗ.
4. «Положение о Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека», утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации от 30 июня 2004 г. N 322.
5. СанПиН 2.1.5.980-00 «Гигиенические требования к охране поверхностных вод».
6. СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества».
7. СанПиН 2.1.4.1116-02 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды, расфасованной в емкости. Контроль качества».
8. СанПиН 2.1.4.1175-02 «Гигиенические требования к качеству воды нецентрализованного водоснабжения. Санитарная охрана источников».
9. СанПиН 2.1.2.1188-03 «Плавательные бассейны. Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды. Контроль качества».
11. МУ 2.1.5.800-99 «Организация госсанэпиднадзора за обеззараживанием сточных вод».
12. «Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции», утверждены Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора Российской Федерации 22 июня 1995 года.
14. «Положение о порядке учета, хранения, обращения, отпуска и пересылки культур бактерий, вирусов, риккетсий, грибов, простейших, микоплазм, бактерийных токсинов, ядов биологического происхождения». М., 1980.
15. ГОСТ 2761-84 «Источники централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения».
16. Руководство по вирусологическим исследованиям полиомиелита. М., 1998.
17. Рекомендации по надзору за вирусом полиомиелита в окружающей среде. Женева, 2003.
18. Инструкция по использованию полимеразной цепной реакции для выявления энтеровирусного загрязнения воды. Минск, 2001.
19. Методики по санитарно-вирусологическому контролю питьевой воды и оценке ее эпидемической безопасности от 18.05.99 N 136-9811, Минск.
20. Инструкция по осуществлению санитарно-вирусологического мониторинга питьевых вод в Республике Беларусь от 11.11.00 N 138-0010, Минск.
21. Boom R., C.J.A. Sol, M.M. Salimans, C.L. Jansen, P.M.E. Wertheimvan Dillen, and J. Van der Noordaa. 1990. Rapid and Simple Method for Purification of Nucleic Acids. J. Clin. Microbiol. 28:495-503.
22. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Eds. J. Sambrook, P. MacCallum D. Russell. CSHL Press, London: 2001, 2344 p.
Судебная практика и законодательство — «МУК 4.2.2029-05. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Санитарно-вирусологический контроль водных объектов. Методические указания» (утв. Роспотребнадзором 18.11.2005)
Отбор проб из водных источников и их транспортирование проводят в соответствии с МУ 4.2.2029-05 «Санитарно-вирусологический контроль водных объектов».
Применение молекулярно-генетических методов исследования, а также сбор, упаковка, хранение и транспортирование биологического материала и образцов объектов окружающей среды (ООС) при обследовании очагов острых кишечных инфекций с групповой заболеваемостью различной этиологии регламентированы МУК 4.2.2746-10 «Порядок применения молекулярно-генетических методов при обследовании очагов острых кишечных инфекций с групповой заболеваемостью».
17. МУК 4.2.2029-05 «Санитарно-вирусологический контроль водных объектов».
18. МУК 4.3.2030-05 «Санитарно-вирусологический контроль эффективности обеззараживания питьевых и сточных вод УФ-облучением».
19. МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ» питьевой воды».
20. МУ 2.1.5.800-99 «Организация госсаэпиднадзора за обеззараживанием сточных вод».