1 процентная пептонная вода как приготовить

1 процентная пептонная вода как приготовить

Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

Canned food. Preparation of reagent solutions, dyes, indicators and culture media for microbiological analysis

Дата введения 1985-07-01

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 17.01.84 дата введения установлена 01.07.85

Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 4-94)

ИЗДАНИЕ (апрель 2010 г.) с Изменением N 1, утвержденным в июле 1990 г. (ИУС 11-90)

Настоящий стандарт распространяется на методы приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1.1. Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред (если нет специальных указаний) применяют:

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;

реактивы квалификации х.ч. и ч.д.а. по ГОСТ 13867-68;

вспомогательные реактивы и растворы по ГОСТ 4517-87;

растворы индикаторов по ГОСТ 4919.1-77.

1.2. Растворы реактивов, красок, индикаторов приготовляют, используя стеклянную, лабораторную, мерную посуду, вымеренную для слива, класса А; для приготовления питательных сред (если нет специальных указаний) используют стеклянную лабораторную мерную посуду, вымеренную для слива, класса Б.

1.4. Если в технологии приготовления питательных сред не указаны условия растворения питательных сред или компонентов, то их растворяют при перемешивании в воде комнатной температуры до полного растворения не менее 15 мин и затем, при необходимости, нагревают до растворения среды или ее компонентов.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

1.6. Питательные среды, если нет специальных указаний, стерилизуют по ГОСТ 26668-85.

1.7. Готовые питательные среды хранят, если нет специальных указаний, при комнатной температуре не более 3 сут и при температуре около 4 °С не более одного месяца.

2. АППАРАТУРА

Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред применяются:

автоклав для стерилизации питательных сред;

стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569-89*;

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51935-2002.

пластины асбестовые фильтрующие и стерилизующие по ГОСТ 480-78;

баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру от 20 до 100 °С с отклонением до 1 °С от заданной;

* С 1 июля 2010 г. введен в действие ГОСТ Р 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

воронки для горячего фильтрования;

воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

гомогенизатор или смеситель лабораторный;

горелка газовая или спиртовка по ГОСТ 25336-82;

дистиллятор электрический марки Д N 9;

колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости по ГОСТ 25336-82;

кюветы разные для окрашивания препаратов;

марля медицинская по ГОСТ 9412-93;

палочки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

пипетки разной вместимости;

плитка электрическая по ГОСТ 14919-83;

пробирки разной вместимости по ГОСТ 25336-82;

ступки фарфоровые по ГОСТ 9147-80;

термометры химические от 0 до 50 °С и от 50 до 100 °С по ГОСТ 28498-90;

термостаты, позволяющие поддерживать температуру в пределах от 28 до 55 °С с отклонением до 0,5 °С от заданной;

фильтры мембранные N 2;

флаконы вместимостью 100-200 см ;

центрифуга, обеспечивающая частоту вращения 50 с (3000 об/мин);

цилиндры разной вместимости по ГОСТ 1770-74;

часы песочные ОСТ 25-11-38-84*;

чашки Петри бактериологические по ГОСТ 25336-82;

3. РЕАКТИВЫ, РАСТВОРЫ И МАТЕРИАЛЫ

Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред применяются:

агар микробиологический по ГОСТ 17206-96;

агар сухой питательный;

аммоний щавелевокислый 1-водный по ГОСТ 5712-78;

водорода пероксид по ГОСТ 10929-76;

бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76;

вата гигроскопическая медицинская по ГОСТ 5556-81;

вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72;

дрожжи хлебопекарные прессованные по ГОСТ 171-81;

Источник

1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1.1. Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред (если нет специальных указаний) применяют:

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;

реактивы квалификации х. ч. и ч. д. а. по ГОСТ 13867-68;

вспомогательные реактивы и растворы по ГОСТ 4517-87;

растворы индикаторов по ГОСТ 4919.1-77.

1.2. Растворы реактивов, красок, индикаторов приготовляют, используя стеклянную, лабораторную, мерную посуду, вымеренную для слива, класса А; для приготовления питательных сред (если нет специальных указаний) используют стеклянную лабораторную мерную посуду, вымеренную для слива, класса Б.

1.4. Если в технологии приготовления питательных сред не указаны условия растворения питательных сред или компонентов, то их растворяют при перемешивании в воде комнатной температуры до полного растворения не менее 15 мин и затем, при необходимости, нагревают до растворения среды или ее компонентов.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

1.6. Питательные среды, если нет специальных указаний, стерилизуют по ГОСТ 26668-85.

1.7. Готовые питательные среды хранят, если нет специальных указаний, при комнатной температуре не более 3 сут и при температуре около 4 °С не более одного месяца.

2. АППАРАТУРА

Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред применяются:

автоклав для стерилизации питательных сред;

стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569-89 * ;

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51935-2002.

пластины асбестовые фильтрующие и стерилизующие по ГОСТ 480-78;

баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру от 20 до 100 °С с отклонением до 1 °С от заданной;

весы лабораторные по ГОСТ 24104-88 ** ;

** С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

воронки для горячего фильтрования;

воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

гомогенизатор или смеситель лабораторный;

горелка газовая или спиртовка по ГОСТ 25336-82;

дистиллятор электрический марки Д № 9;

колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости по ГОСТ 25336-82;

кюветы разные для окрашивания препаратов;

марля медицинская по ГОСТ 9412-93;

палочки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

пипетки разной вместимости;

плитка электрическая по ГОСТ 14919-83;

пробирки разной вместимости по ГОСТ 25336-82;

ступки фарфоровые по ГОСТ 9147-80;

термометры химические от 0 до 50 °С и от 50 до 100 °С по ГОСТ 28498-90;

термостаты, позволяющие поддерживать температуру в пределах от 28 до 55 °С с отклонением до 0,5 °С от заданной;

фильтры мембранные № 2;

цилиндры разной вместимости по ГОСТ 1770-74;

часы песочные ОСТ 25-11-38-84;

чашки Петри бактериологические по ГОСТ 25336-82;

3. РЕАКТИВЫ, РАСТВОРЫ И МАТЕРИАЛЫ

Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред применяются:

агар микробиологический по ГОСТ 17206-96;

агар сухой питательный;

аммоний щавелевокислый 1-водный по ГОСТ 5712-78;

водорода пероксид по ГОСТ 10929-76;

бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76;

вата гигроскопическая медицинская по ГОСТ 5556-81;

вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72;

дрожжи хлебопекарные прессованные по ГОСТ 171-81;

желатин пищевой по ГОСТ 11293-89;

железо (II) сернокислое 7-водное по ГОСТ 4148-78;

железо треххлористое 6-водное по ГОСТ 4147-74;

калий азотнокислый по ГОСТ 4217-77;

калий двухромовокислый по ГОСТ 4220-75;

калий сернокислый по ГОСТ 4145-74;

калий углекислый по ГОСТ 10690-73;

калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198-75 или двузамещенный 3-водный по ГОСТ 2493-75;

кальций углекислый по ГОСТ 4530-76;

кислота лимонная пищевая по ГОСТ 908-2004;

кислота молочная пищевая по ГОСТ 490-2006;

кислота соляная по ГОСТ 3118-77;

кислота уксусная по ГОСТ 61-75;

крахмал растворимый по ГОСТ 10163-76;

кровь крупного рогатого скота, лошади или барана;

лакмус или лакмоид;

литий хлористый 6-водный;

масло вазелиновое медицинское по ГОСТ 3164-78;

медь (II) сернокислая 5-водная по ГОСТ 4165-78;

молоко коровье пастеризованное по ГОСТ 13277-79 * ;

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52090-2003.

мясо говядина по ГОСТ 779-55, мясо баранина по ГОСТ 1935-55 ** ;

** На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52843-2007.

мука кукурузная по ГОСТ 14176-69;

натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77;

натрий лимоннокислый трехзамещенный по ГОСТ 22280-76;

натрий углекислый по ГОСТ 83-79;

натрий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 11773-76 и однозамещенный 2-водный по ГОСТ 245-76;

натрий уксуснокислый 3-х водный по ГОСТ 199-78;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

поджелудочная железа убойного скота;

плазма крови кроличья или человеческая;

пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805-76;

печень говяжья, телячья, кроличья, не содержащая ингибиторов, роста микроорганизмов;

рыба треска или пикша, судак, щука по ГОСТ 814-96;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67 *** ;

*** На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.

спирт этиловый сырец по ГОСТ 131-67 *4 ;

*4 На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52193-2003.

сок томатный по ГОСТ 937-91 *5 ;

*5 На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52183-2003.

триптический гидролизат казеина;

2, 3, 5-трифенилтетразолиум хлорид;

фуксин (основной и кислый);

экстракт дрожжевой сухой;

*6 На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52121-2003.

4. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ РЕАКТИВОВ, КРАСОК, ИНДИКАТОРОВ
И КОМПОНЕНТОВ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

2,0 г агара растворяют в 98 см 3 дистиллированной воды, стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 20 мин.

Применяют для наслаивания на посевы с целью предотвращения соприкосновения посевов с кислородом воздуха.

4.2. Взвесь (эмульсия) яично-желточная в физиологическом растворе.

Из яйца, протертого с поверхности спиртом с объемной долей 70 %, извлекают пипеткой желток и смешивают его со 100 см 3 физиологического раствора. Желточную эмульсию приготовляют аналогично, но берут два желтка и смешивают их с 10 см 3 физиологического раствора.

Добавляют к питательным средам для определения лецитиназной активности микроорганизмов.

Соблюдая правила асептики, собирают эмульсию над осадком. Эмульсию хранят при температуре от 0 до плюс 5 °С не более 72 ч.

4.2, 4.3. (Измененная редакция, Изм. № 1).

1 г пептона растворяют в 1 дм 3 дистиллированной воды, разливают по 10 см 3 в пробирки и по 100 см 3 в колбы. Затем стерилизуют 20 мин при температуре (121 ± 1) °С.

0,5; 1; 10; 20 г глюкозы переносят, смывая стерильной дистиллированной водой, в мерную колбу вместимостью 100 см 3 и доводят объем до метки. Разливают приготовленный раствор глюкозы в стерильные пробирки и стерилизуют при температуре (112 ± 1) °С в течение 15 мин или при температуре (100 ± 1) °С в течение 3 сут по 30 мин, или фильтрованием через мембранный фильтр.

Применяют в качестве источника углеводов в питательных средах и восстанавливающего вещества в питательных средах для анаэробных микроорганизмов.

4.6. Индикатор Андреде

0,5 г кислого фуксина растворяют в 100 см 3 дистиллированной воды, прибавляют 16,4 см 3 раствора гидроокиси натрия с (NaOH) = 1 моль/дм 3 и стерилизуют при температуре (100 ± 1) °С в течение 5 мин. Индикатор должен иметь соломенно-желтый цвет. Хранят во флаконе из темного стекла (с притертой пробкой).

Применяют для приготовления среды Гисса.

Применяют для определения кислотообразующей способности микроорганизмов.

Применяют для контроля pH питательных сред.

4.9. Кальций углекислый стерильный

Фасуют от 2 до 100 г углекислого кальция в пробирки колбы или флаконы и стерилизуют воздухом по ГОСТ 26668-85.

Добавляют к питательным средам, предназначенным для посева в них кислотных продуктов.

4.10. Раствор аскорбиновой кислоты концентрации 50 г/дм 3 готовят по ГОСТ 4517-87 и стерилизуют фильтрованием через мембранный фильтр № 2.

Применяют в качестве восстановителя, связывающего кислород в питательных средах для анаэробных микроорганизмов.

Применяют для подкисления питательных сред.

4.10, 4.11. (Измененная редакция, Изм. № 1).

4.12. Кусочки мяса, фарша, мясная вода, мясной отвар

Освобожденное от костей, жира, сухожилий мясо говядины или конины для приготовления мясного отвара режут на мелкие кусочки или для приготовления мясной воды пропускают через мясорубку, заливают водой из расчета 1 дм 3 воды на 500 г мяса и оставляют на ночь в холодильнике. На следующий день смесь мяса с водой медленно нагревают до кипения и кипятят до готовности, периодически помешивая и доливая воду до первоначального объема. Небольшое количество смеси (до 5 дм 3 ) можно кипятить на открытом огне, часто помешивая, чтобы не произошло пригорания частичек мяса.

Применяют в качестве компонентов питательных сред.

4.13. Кусочки печени, печеночная вода, печеночные отвар и бульон

(Измененная редакция, Изм. № 1).

4.14. Лакмус водно-спиртовой раствор (лакмусовая настойка), приготовляют по ГОСТ 4919.1-77.

Добавляют в питательные среды для определения способности микроорганизмов к редукции лакмуса.

4.15. Масло вазелиновое

Применяют для наслаивания на жидкие питательные среды для анаэробных микроорганизмов.

4.16. Молоко обезжиренное

Молоко доводят до кипения, оставляют на сутки в холодильнике, освобождают от сливок, вторично доводят до кипения, вновь оставляют на 1 сут в холодильнике и вторично снимают верхний слой. Обезжиренное молоко может быть приготовлено путем сепарирования. Обезжиренное молоко разливают в стерильную посуду и стерилизуют при температуре 100 °С в течение 3 сут по 30 мин или однократно при температуре (116 ± 1) °С в течение 20 мин. После стерилизации молоко не должно принимать коричневый оттенок.

Обезжиренное молоко применяют в качестве компонента питательных сред.

4.17. Раствор гидроокиси натрия концентрации 100 г/дм 3 готовят по ГОСТ 4517-87.

Применяют для подщелачивания питательных сред.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

4.18. Пептонно-солевой раствор, готовят по ГОСТ 26669-85.

Применяют для приготовления разведений.

4.19. Пирогаллол, щелочной раствор, готовят по ГОСТ 4517-87.

Применяют для поглощения кислорода в емкостях, предназначенных для анаэробных микроорганизмов.

4.20. Цитратная плазма крови

Плазма кролика может быть заменена человеческой. Не допускается использовать плазму крови человека, которому незадолго до взятия крови вводилась глюкоза.

Человеческая плазма не может быть использована, если исследуемая культура выращивалась в атмосфере углекислоты. В обоих случаях происходит угнетение реакции плазмокоагуляции. Допускается использовать сухую цитратную плазму кролика.

Применяют для определения коагулазной способности микроорганизмов.

Оба раствора стерилизуют раздельно при температуре (115 ± 1) °С в течение 30 мин.

Добавляют по 5 см 3 каждого раствора в 100 см 3 охлажденной, регенерированной питательной среды для клостридий непосредственно перед посевом.

4.22. Раствор Люголя

Применяют для контроля степени осахаривания сусла.

4.23. Раствор I-нафтола

5 г I-нафтола, имеющего точку плавления 92,5 °С, вносят в мерную колбу вместимостью 100 см 3 и доливают этиловым спиртом с объемной долей 96 % до метки.

Раствор применяют свежеприготовленным для контроля ацетилметилкарбинола.

4.24. Раствор панкреатина

Раствор применяют для активации протоксина возбудителей ботулизма.

4.25. Растворы и реактивы для окраски по Граму

4.25.1. Основной красящий раствор по Хукеру

0,8 г щавелевокислого аммония растворяют в 80 см 3 воды; растворы смешивают и выдерживают в течение 24 ч при комнатной температуре перед употреблением.

4.25.2. Йодный раствор по Бурке

4.25.3. Контрастный красящий раствор

0,25 г сафранина растворяют в 10 см 3 спирта и полученный раствор смешивают со 100 см 3 воды.

Спиртовой раствор основного фуксина концентрации 5 г/дм 3 используют для выявления глобул в бациллярных клетках.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

4.25.5. Для удаления закрепленного основного красящего раствора используют этиловый спирт (при окраске по Хукеру) и ацетон (при окраске водным раствором кристаллического фиолетового).

4.26. Растворы и реактивы для окраски бактериальных спор

5 г малахитовой зелени растворяют в 100 см 3 воды.

Отдельно 0,5 г сафранина растворяют в 100 см 3 воды.

4.27. Раствор соляной кислоты концентрации 36,5 г/дм 3

Раствор применяют для подкисления питательных сред.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

4.28. Смесь реактивов для создания анаэробных условий

Смешивают 1 г пирогаллола, 1 г углекислого безводного калия и 5 г инфузорной земли и фасуют в бумажные пакеты.

Применяют для создания анаэробных условий.

4.29. Физиологический раствор

0,85 г хлористого натрия растворяют в 100 см 3 дистиллированной воды и стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 20 мин.

Применяют для приготовления растворов реактивов.

4.30. Реактив йодокрахмальный, готовят по ГОСТ 4517-87. Бумагу не пропитывают.

Используют в виде раствора для контроля отсутствия нитритов в питательных средах.

4.31. Парафиновая смесь

Растапливают равные количества парафина и вазелинового масла, смешивают и стерилизуют горячим воздухом при температуре (140 ± 1) °С в течение 60 мин.

Применяют для наслаивания на жидкие питательные среды для анаэробных микроорганизмов.

4.32. Дрожжевой экстракт

Добавляют в питательные среды как источник веществ, способствующих регенерации поврежденных микроорганизмов.

4.33. Раствор с объемной долей перекиси водорода 3 %

Раствор применяют для определения каталазной активности.

(Введен дополнительно, Изм. № 1).

5. ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

5.1. Агар Байрд-Паркер

Основа среды: в 1 дм 3 дистиллированной воды вносят 10 г триптона или пептона, 17,9 г хлористого лития 6-водного, 5 г мясного экстракта и 5 см 3 дрожжевого экстракта.

При отсутствии мясного экстракта вместо дистиллированной воды и мясного экстракта используют 1 дм 3 мясной воды или бульона Хоттингера или 1 дм 3 мясо-пептонного бульона.

При использовании мясо-пептонного бульона триптон или пептон в среду не вносят.

После тщательного перемешивания приготовленную среду разливают в чашки Петри. Чашки со средой можно хранить не более 48 ч.

Применяют для культивирования стафилококков.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

5.2. Желточный агар с ТТХ

К 500 см 3 стерильного мясо-пептонного агара, расплавленного и затем охлажденного до температуры 45°, прибавляют 20 см 3 желточной эмульсии и 25 мг 2, 3, 5-трифенилтетразолиум хлорида. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри, хранят в холодильнике не более 10 сут.

Применяют для культивирования Вас. cereus.

5.4. Молочно-солевой агар

Применяют для культивирования стафилококков.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

5.5. Печеночный агар

Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.

5.6. Сахарный кровяной агар по Цейсслеру

Применяют для определения гемолитической активности микроорганизмов.

5.7. Яично-желточно-азидный агар

Применяют для культивирования стафилококков.

5.8. Яично-желточно-солевой агар

1 дм 3 мясо-пептонного агара перед анализом расплавляют и растворяют в нем 95 г хлористого натрия, охлаждают до температуры (45 ± 1) °С и добавляют 100 см 3 яично-желточной взвеси. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Чашки хранят в холодильнике не более 5 сут.

Применяют для культивирования стафилококков.

5.7; 5.8. (Измененная редакция, Изм. № 1).

5.9. Глюкозо-триптонный (агар) бульон

Применяют для культивирования мезофильных и кислотообразующих термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.10. Картофельно-пептонный (агар) бульон

Применяют для культивирования термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.11. Кислый протеозо-пептонный (агар) бульон

Применяют для культивирования термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.12. Мясо-пептонный (агар) бульон

Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.13. Мясо-пептонный (агар) бульон с глюкозой

Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов и для определения общего количества микроорганизмов подсчетом на чашках Петри.

5.14. Мясо-пептонный (агар) бульон с глюкозой и дрожжевым экстрактом

К 1 дм 3 мясо-пептонного (агара) бульона с глюкозой добавляют асептически 2 г дрожжевого экстракта или 10 см 3 раствора дрожжевого экстракта.

Применяют для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.15. Мясо-пептонный бульон с растворимым крахмалом

10 г крахмала добавляют в небольшую порцию воды и при помешивании вносят в кипящую дистиллированную воду, получая 100 см 3 крахмального раствора. Полученный раствор смешивают с 900 см 3 мясо-пептонного бульона, содержащего триптофан (положительная качественная реакция на триптофан) и стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 20 мин. Среда должна иметь pH (7,1 ± 0,1).

Применяют для культивирования кислотообразующих термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.16. Мясо-пептонный бульон с углекислым кальцием

Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов при анализе кислотных консервированных продуктов.

5.17. Мясо-пептонный бульон с нитратами

К 100 см 3 мясо-пептонного бульона, свободного от нитритов (проверяют йодкрахмальным реактивом по п. 4.30, при наличии нитритов появляется слабо-розовое окрашивание), добавляют 0,2 г свободной от нитритов калийной селитры. Разливают среду по 5 см 3 в пробирки, промытые дистиллированной водой не менее пяти раз.

Применяют для определения нитратредуцирующей способности микроорганизмов.

5.18. Рыбо-пептонный бульон

Рыбу, освобожденную от костей и жира, пропускают через мясорубку и заливают холодной водопроводной водой из расчета 1 дм 3 воды на 500 г рыбы. Смесь фарша с водой медленно нагревают до кипения и кипятят в течение 1,5 ч. Небольшое количество (до 5 дм 3 ) можно кипятить на открытом огне, часто помешивая, чтобы не произошло пригорания частичек рыбы. Большое количество лучше кипятить в котлах с паровой рубашкой. Для определения готовности рыбной воды сначала фильтруют небольшое количество ее в пробирку через бумажный фильтр. Если жидкость прозрачная, рыбная вода готова. Затем жидкость отцеживают через полотно, сюда же отжимают весь сок из вареной рыбы, добавляют кипяченой воды до первоначального объема и разливают.

5.19. Рыбо-пептонный бульон с глюкозой

К 1 дм 3 рыбо-пептонного бульона перед стерилизацией добавляют 10 г глюкозы. Стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 20 мин.

5.20. Бульон Хоттингера и среды, его содержащие

5.20.2. Для приготовления бульона Хоттингера смешивают 200 см 3 основного раствора Хоттингера, 400 см 3 мясного отвара и 400 см 3 воды, добавляют 5 г хлористого натрия, 0,2 г фосфорнокислого двузамещенного натрия или фосфорнокислого двузамещенного калия, кипятят 10 мин и устанавливают pH (7,6 ± 0,1). Бульон Хоттингера разливают высоким столбиком по пробиркам или флаконам, на дно которых кладут кусочки вареного мяса или фарша, наслаивают стерильное вазелиновое масло высотой около 2,0 см и стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 20 мин.

5.20.4. Плотную среду Хоттингера с глюкозой и дрожжевым экстрактом приготовляют по п. 5.19.3, но без триптона и аскорбиновой кислоты.

Количество пепсина, прибавляемого к смеси мяса, печени и воды определяется его титром, но прибавляют его на 50 % больше, чем подсчитано. Например, при титре пепсина 1:10 для расщепления 2,5 кг белка требуется 0,25 г пепсина: в действительности же его прибавляют 0,375 г.

Пепсин оставляют действовать на смесь в течение 20 ч при температуре 50 °С в водяной бане. После 20 ч воздействия пепсина на смесь она должна давать положительную биуретовую реакцию и реакцию на триптофан.

При положительной реакции образуется фиолетовая окраска. Реакцию на триптофан устанавливают с бромной водой (п. 5.20.1).

После растворения пептона и агара (при подогревании) вновь устанавливают pH (7,4 ± 0,1). Бульон или агар разливают в колбы и стерилизуют при температуре (127 ± 1) °С в течение 20 мин.

Применяют для мезофильных анаэробных микроорганизмов.

5.22. Дифференциальная улучшенная клостридиальная среда (жидкая, вязкая или плотная)

Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.

5.21, 5.22. (Измененная редакция, Изм. № 1).

5.23. Лакмусовое молоко

Применяют для мезофильных клостридий при анализе молочных консервов и при культивировании С. perfringens.

5.24. Пептонная среда с глюкозой (глюкозо-пептонный бульон)

Применяют для культивирования микроорганизмов и определения их способности образовывать ацетилметилкарбинол.

5.25. Печеночно-глицериновая среда

Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.

5.26. Плотная среда Бликфельдта

Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

5.27. Жидкая среда Бликфельдта

В 800 см 3 дистиллированной воды растворяют 10 г лактозы, 10 г глюкозы, 5 г пептона, кипятят и фильтруют через бумажный фильтр. К фильтрату добавляют 4 г дрожжевого экстракта или 20 см 3 раствора дрожжевого экстракта, 10 см 3 раствора бромкрезолпурпура, устанавливают pH (7,3 ± 0,1), разливают в стерильную посуду и стерилизуют при температуре (117 ± 1) °С не более 20 мин.

Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.

5.28. Среда Вильсона-Блера, измененная для анаэробов

Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов и определения их сульфитредуцирующей способности.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

10 г пептона и 5 г хлористого натрия растворяют в 1 дм 3 дистиллированной воды при нагревании, фильтруют через бумажный фильтр так, чтобы раствор был прозрачным, прибавляют 10 г углевода (глюкозы, лактозы, мальтозы, маннита или сахарозы) в зависимости от выявляемой микрофлоры.

Применяют для определения сахаролитической способности микроорганизмов.

5.30. Среда из вареного мяса (Cooked-Meat Medium)

500 г свежего, освобожденного от костей, жира и сухожилий мяса или сердца крупного рогатого скота помещают в 500 см 3 кипящей дистиллированной воды, содержащей 1,5 см 3 раствора с (NaOH) = 1 моль/дм 3 и кипятят в течение 20 мин; в конце кипячения в смесь добавляют молочную кислоту в количестве, необходимом для доведения pH смеси до (7,0 ± 0,1). Горячую жидкость фильтруют через ватно-марлевый фильтр, к отфильтрованной жидкости добавляют пептон в количестве 0,5 г пептона на 100 см 3 жидкости и хлористый натрий в количестве 0,25 г хлористого натрия на 100 см 3 жидкости. Полученную жидкость вновь кипятят в течение 20 мин, добавляют в нее 1 см 3 соляной кислоты и фильтруют. Доводят pH фильтрата до (8,2 ± 0,1) и кипятят его в течение 3 мин.

Применяют для культивирования анаэробных микроорганизмов.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

5.31. Среда из сухого питательного агара

5.32. Среда из сухого питательного агара с глюкозой

5.33. Среда из томатного сока

Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.

5.34. Среда Китт-Тароцци

При посевах в свежеприготовленную среду Китт-Тароцци (не более 3 сут с момента приготовления) добавлять агар, вазелиновое масло или наслаивать на ее поверхность голодный агар не обязательно.

Применяют для культивирования мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.

5.35. Среда Китт-Тароцци с углекислым кальцием

В пробирки или флаконы, предназначенные для среды Тароцци, добавляют на дно щепотку углекислого кальция, стерилизуют горячим воздухом по ГОСТ 26668-85, закладывают в них кусочки мяса или печени и заливают мясо-пептонным бульоном с глюкозой, приготавливая среду Тароцци по вышеописанной технологии.

Применяют для анаэробных микроорганизмов, для посева кислотных консервированных продуктов.

5.36. Среда Китт-Тароцци с углекислым кальцием, дрожжевым экстрактом и аскорбиновой кислотой

Готовят среду Китт-Тароцци с углекислым кальцием, но в мясо-пептонный бульон перед фасовкой вносят 2 г дрожжевого экстракта или 10 см 3 раствора дрожжевого экстракта. Перед анализом в регенерированную среду Китт-Тароцци с углекислым кальцием и дрожжевым экстрактом асептически вносят аскорбиновую кислоту из расчета 100 мкг на 1 дм 3 среды.

Применяют для мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.

Для внесения аскорбиновой кислоты в среду раствор, приготовленный по п. 4.10, разводят в стерильной дистиллированной воде в 100 раз и 0,2 см 3 приготовленного раствора вносят на 1 дм 3 среды.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

Применяют для выявления мезофильных анаэробных и микроорганизмов при анализе консервов с pH 4,4 и ниже.

5.38. Пептонная среда с триптофаном

Применяют для культивирования С. perfringens.

В 1 дм 3 горячей дистиллированной воды растворяют 10 г пептона и 40 г глюкозы или мальтозы, разливают в стерильную посуду и стерилизуют 20 мин при температуре (112 ± 1) °С.

Применяют для дрожжей и плесневых грибов.

5.41. Среда Смис-Лоренца

5 г глюкозы, 10 г пептона или триптона, или триптозы (Дифко), 20 г агара растворяют при подогревании в 950 см 3 воды; отдельно 5 г растворимого крахмала растворяют в 50 см 3 воды и раствор вносят в среду, устанавливают pH (7,1 ± 0,1) и стерилизуют при температуре (117 ± 1) °С в течение 20 мин.

Применяют для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных кислотообразующих термофильных микроорганизмов.

5.42. Крахмало-пептонная среда, обогащенная триптофаном

Применяют для культивирования кислотообразующих аэробных и факультативно-анаэробных термофильных микроорганизмов.

5.43. Сульфат-лактатная (плотная, вязкая) среда

Применяют для культивирования термофильного анаэроба D. nigrificans.

5.44. Солодовое сусло

Солодовое неохмеленное сусло готовят следующим образом.

Применяют для культивирования дрожжей и плесневых грибов.

5.45. Солодовое агаризованное сусло

Применяют для культивирования дрожжей и плесневых грибов.

5.46. Солодовое агаризованное сусло с углекислым кальцием

Применяют для культивирования дрожжей, плесеней и молочнокислых бактерий.

5.47. Улучшенная клостридиальная среда (R. С. М.)

Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.

5.48. Среда питательная для контроля стерильности, сухая.

В 33,0 г сухого порошка среды входят:

ферментативный гидролизат казеина неглубокой степени расщепления 15,0 г;

Среду применяют для культивирования мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.

Источник