v parahaemolyticus в рыбе
ВВЕДЕНИЕ
Галофильные парагемолитические вибрионы широко распространены в морских бассейнах многих стран мира. Они обнаруживаются в морской воде, рыбе, беспозвоночных и планктоне. Встречаемость указанных микроорганизмов в гидробионтах зависит от сезона года, районов лова, загрязненности, температуры, солености воды и других факторов. Эпидемиологическая обстановка по парагемолитическим вибрионам в районах лова ухудшается чаще в теплый период года.
Галофильные вибрионы активно размножаются при концентрации хлорида натрия в среде от 3 до 8%. Количество их в воде, морепродуктах может колебаться от единиц до сотен тысяч клеток в 1 г и более.
Галофильные парагемолитические вибрионы относятся к группе потенциально патогенных микроорганизмов.
При попадании в организм человека с продуктами моря, особенно не
подвергнутыми термической обработке, парагемолитические вибрионы способны
вызывать пищевые токсикоинфекции, протекающие по типу острых
гастроэнтеритов, в отдельных случаях носящих холероподобный характер. Доза
При наличии эпидемиологической ситуации настоящие Указания предусматривают выявление парагемолитических вибрионов в сырье: свежем, охлажденном, мороженом; в готовой продукции из рыбы и морских беспозвоночных: кулинарной, холодного и горячего копчения, соленой, пряной, маринованной, вяленой, сушеной, белковых продуктах, икре, пресервах. Периодически сырье необходимо контролировать при экологическом неблагополучии водного бассейна региона лова.
Анализы по выявлению в рыбопродукции парагемолитических вибрионов осуществляют учреждения государственного санитарного надзора, лаборатории научно-производственных рыбопромышленных объединений, лаборатории научно-исследовательских институтов рыбной промышленности на договорных началах.
В Методических указаниях представлены показатели допустимой обсемененности сырья и готовой продукции из рыбы и морских беспозвоночных, методы отбора проб, методики выявления и подсчета парагемолитических вибрионов, рецептура питательных сред, гигиеническая оценка пищевых рыбных продуктов, рекомендации, литература.
С изданием настоящих Методических указаний утрачивают силу Временные методические рекомендации по контролю за содержанием V. parahaemolyticus в рыбе и рыбопродуктах. Методы исследования и нормативы, N 3933-85, утв. Минздравом СССР 20.09.85.
1. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ НОРМАТИВЫ
ДЛЯ ПАРАГЕМОЛИТИЧЕСКИХ ВИБРИОНОВ
Допустимое количество парагемолитических вибрионов в сырье (свежем, охлажденном, мороженом) не должно превышать 10 КОЕ/г.
Допускается присутствие вибрионов до 500 КОЕ/г при условии направления сырья на технологическую переработку: замораживание, крепкий посол, термообработку.
Парагемолитические вибрионы должны отсутствовать в 25 г сырья (мидии, устрицы и др.), употребляемого в пищу в сыром виде, а также в 25 г икры.
В случае исследования рыбопродукции кулинарной, холодного и горячего копчения, пресервов, соленой, пряной, маринованной рыбы, вяленой, сушеной продукции белковых продуктов на присутствие парагемолитических вибрионов, их количество не должно превышать 10 КОЕ/г.
2. ОТБОР ПРОБ СЫРЬЯ И ГОТОВОЙ ПРОДУКЦИИ,
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Отбор проб и подготовку к анализу проводят согласно ГОСТ 26668-85 и ГОСТ 26669-85. Пищевые и вкусовые продукты и Инструкции по санитарно-микробиологическому контролю производства продукции из рыбы и морских беспозвоночных, 1991.
При количественном определении парагемолитических вибрионов подготовленную навеску массой 25 г переносят в стерильную колбу, добавляют 225 куб. см 0,1-процентного раствора пептонной воды с 3% хлорида натрия. Полученное разведение тщательно взбалтывают, не допуская намокания пробки, и готовят последующие десятикратные разведения (1:100 и 1:1000), определенные объемы которых засевают на плотную среду.
Для выявления отсутствия-присутствия парагемолитических вибрионов отбирает подготовленную навеску массой 25 г и переносят в 100 куб. см жидкой среды обогащения (п. 5.3).
3. МЕТОДЫ АНАЛИЗОВ
Методы основаны на выявлении типичных колоний, вырастающих на дифференциально-диагностическом агаре при посеве разведений продукта и установлении принадлежности бактерий к парагемолитическим вибрионам по морфологическим и биохимическим свойствам.
Учитывают рост типичных колоний: плосковыпуклые полупрозрачные колонии правильной округлой формы с ровными краями, влажной блестящей поверхностью, голубовато-зеленоватого цвета на аналогичном фоне среды.
Для подтверждения принадлежности выделенных на дифференциально-диагностических средах микроорганизмов к парагемолитическим вибрионам проводят изучение их морфологических свойств, биохимическое тестирование при использовании специальных питательных сред или систем индикаторных бумажных (СИБ) для идентификации вибрионов.
С этой целью из изолированных колоний, характерных или подозрительных на парагемолитические вибрионы, делают препараты, окрашивая по Граму, и микроскопируют.
В целях клинической диагностики или эпидемиологического расследования перечень тестов для идентификации выделенных парагемолитических вибрионов будет намного расширен. В этих случаях исследования проводятся в соответствии с действующей Инструкцией о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях, N 1135-73, Минздрав СССР.
Для идентификации выбранных бактерий делают пересев с ДДА на 1-процентную пептонную воду с 3% хлорида натрия (п. 5.2). На пептонной воде парагемолитические вибрионы дают помутнение с образованием нежной голубой пленки.
Тест подвижности
Подвижность определяют при микроскопировании с помощью фазово-контрастного микроскопа в раздавленной капле или при посеве уколом односуточной бульонной культуры в полужидкий агар (0,25% агара), содержащий 3% хлорида натрия. Посевы инкубируют при температуре 37 °C в течение 24 ч. Подвижные формы образуют диффузное помутнение, слабоподвижные вырастают по ходу укола.
Тест на оксидазную активность
Наличие цитохромоксидазы является отличительным признаком от семейства кишечных палочек Enterobacteriaceae, которые не обладают оксидазной активностью.
Рост на лактозо-сахарозной среде
Отношение к лактозе и сахарозе определяют путем засева культуры штрихом по скошенной поверхности и уколом в столбик среды, содержащей 3% хлорида натрия, лактозу, сахарозу и индикатор (п. 5.7). Инкубируют при температуре 37 °C в течение 18 ч. Парагемолитические вибрионы цвет среды не изменяют, газа не образуют.
Галофильные свойства
Для определения галофильных свойств культуру засевают в 5 куб. см 1-процентной пептонной воды (pH 7,8) без содержания и с содержанием 3, 8 и 10% хлорида натрия (п. 5.2). Посевы термостатируют при температуре 37 °C в течение 24 ч. Парагемолитические вибрионы хорошо развиваются в средах, содержащих от 3 до 8% хлорида натрия, и не дают роста в средах, не содержащих хлорида натрия или содержащих 10% хлорида натрия.
Тест декарбоксилазной активности
После посева в каждую пробирку добавляют 0,5 куб. см стерильного вазелинового масла и термостатируют 24 ч при температуре 37 °C.
Если микроорганизмы вырабатывают декарбоксилазу к аминокислоте, то после окисления глюкозы происходит подщелачивание среды, и она приобретает фиолетовый оттенок. Если реакция отрицательная, среда становится желтой.
Для вибрионов характерно декарбоксилирование лизина.
Образование декарбоксилазы к лизину является отличительным признаком от образующих газ представителей рода Aeromonas, среди которых есть галофильные микроорганизмы.
Тест на образование индола
Для определения способности микроорганизмов образовывать индол в 5 куб. см питательной среды (п. 5.2) засевают 1 петлю односуточной бульонной культуры. Под пробку вставляют специально приготовленные бумажки на индол (п. 5.14). Термостатируют 24 ч при 37 °C. При росте парагемолитических вибрионов образуется индол, при этом бумажка меняет цвет. При отрицательной реакции цвет бумажек на индол не изменяется.
Способность образования ацетилметилкарбинола
(реакция Фогес-Проскауэра)
Способность образования ацетилметилкарбинола определяют путем посева односуточной культуры в бульон Кларка с 3% хлорида натрия (п. 5.9). Посев инкубируют 24 ч при температуре 37 °C. Затем к 1 куб. см культуры добавляют 0,6 куб. см альфа-нафтола (6-процентный раствор в абсолютном спирте) и 0,2 мл 40-процентного раствора едкого калия (KOH). Пробирку встряхивают и снова помещают в термостат на 1 ч при температуре 37 °C. Так как парагемолитические вибрионы не образуют ацетилметилкарбинола, цвет среды не изменяется.
Определение интенсивности кислотообразования
(реакция с метиловым красным индикатором)
Ферментация углеводов
Для вибрионов характерно расщепление глюкозы с образованием кислоты без газа на среде Хью-Лейфсона как в аэробных, так и в анаэробных условиях (п. 5.11). Определение типа расщепления глюкозы позволяет отличать вибрионы от сходных с ними по морфологии представителей рода Pseudomonas и Comonomonus.
Ниже приведена схема бактериологического исследования на галофильные парагемолитические вибрионы. Характеристика свойств галофильных парагемолитических вибрионов и сходных с ними микроорганизмов приведена в таблице.
Схема бактериологического исследования на галофильные
парагемолитические вибрионы
1-й день 1. Посев на ДДА из разведений или накопительной культуры.
2-й день 1. Изучение роста на ДДА, подсчет и отсев подозрительных
колоний на 1-процентную пептонную воду с 3% хлорида натрия.
3-й день 1. Пересев с 1-процентной пептонной воды с 3% хлорида натрия
4-й день 1. Изучение морфологии чистых культур с окраской по Граму.
2. Определение подвижности.
3. Посев на щелочной агар для определения оксидазной
4. Посев на среду лактозо-сахарозную.
5. Посев на 1-процентную пептонную воду с различными
концентрациями хлорида натрия (тест на галофильность).
6. Посев на среду ДАГВ для определения декарбоксилазной
7. Посев на среды Гисса для определения ферментативной
8. Посев на 1-процентную пептонную воду с 3% хлорида натрия для
определения способности образования индола.
9. Посев на среду Кларка для определения способности
10. Посев на среду Кларка для определения интенсивности
11. Посев на среду Хью-Лейфсона для определения типа
12. Постановка теста на оксидазу.
5-й день 1. Оценка биохимической активности.
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СВОЙСТВ ГАЛОФИЛЬНЫХ
ПАРАГЕМОЛИТИЧЕСКИХ ВИБРИОНОВ И СХОДНЫХ
С НИМИ МИКРООРГАНИЗМОВ
¦ Основные признаки ¦ Микроорганизмы ¦
¦ ¦ V. ¦ V. ¦ V. cho- ¦ Aero- ¦ Plesio- ¦ Pse- ¦ Sal- ¦ Pro- ¦
¦ ¦ para- ¦ algi- ¦ lerae ¦ monas ¦ monas ¦ udo- ¦ mone- ¦ teus ¦
МУК 4.2.2046-06 Методы выявления и определения парагемолитических вибрионов в рыбе, нерыбных объектах промысла, продуктах, вырабатываемых из них, воде поверхностных водоемов и других объектах
Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Методы выявления и определения
парагемолитических вибрионов в рыбе,
нерыбных объектах промысла, продуктах,
вырабатываемых из них, воде поверхностных
водоемов и других объектах
1. Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. М. Федоров); ФГУЗ Ростовский-на-Дону Ордена Трудового Красного Знамени Научно-исследовательский противочумный институт (Ю. М. Ломов, Б. Н. Мишанькин, Л. М. Смоликова, Л. Г. Воронежская, Л. С. Подосинникова, А. Е. Либин-зон, Е. М. Санамянц, Е. Н. Голенищева, Н. В. Божко, Н. Г. Пузанова, А. Б. Мазрухо, Д. И. Каминский); ФГУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора (И. В. Братина, Э. Ф. Опочинский, Н. С. Кривопалова); ФГУЗ Причерноморская противочумная станция (Г. В. Гальцева); ГУ Научно-исследовательский институт питания РАМН (С. А. Шевелева).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 6 октября 2005 г. (протокол № 3).
3. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 30 января 2006 г.
Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
Дата введения: 1 апреля 2006 г.
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Методы выявления и определения
парагемолитических вибрионов в рыбе,
нерыбных объектах промысла, продуктах,
вырабатываемых из них, воде поверхностных
водоемов и других объектах
1. Область применения
1.2. Настоящие методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут использоваться другими организациями, аккредитованными в установленном порядке.
Требования к качеству рыбы, нерыбных объектов промысла и продуктов, вырабатываемых из них, определены СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов».
Исследование рыбы и морских беспозвоночных на присутствие парагемолитических вибрионов проводят в порядке текущего надзора (контроля) на этапах производства и реализации, по эпидемическим показаниям, а также в случае возникновения неблагоприятной экологической ситуации в регионе лова рыбы, моллюсков и ракообразных.
При выявлении в прибрежных морских зонах спорадических или групповых случаев заболевания, обусловленных парагемолитическими вибрионами, а также при возникновении неблагоприятной экологической ситуации проводят исследование воды открытых водоёмов и обитающих в них гидробионтов, а также свежевыловленных гидробионтов в местах их организованной и неорганизованной реализации.
3. Отбор проб для микробиологического анализа
Микробиологическому анализу подлежат: сырье, используемое для производства различных видов рыбной продукции, употребляемые в пищу в сыром виде продукты моря, различные виды готовой продукции, соленая, вяленая, копченая рыба, консервы, икра и т. д. в соответствии с перечнем групп продуктов в санитарно-эпидемиологических правилах и нормативах СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов», разделе 1.3. Отбор проб и подготовку к исследованию осуществляют согласно ГОСТ 26668-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов», ГОСТ 26669-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов», ГОСТ 7631-85 «Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Правила приемки, органолептические методы оценки качества, методы отбора проб для лабораторных испытаний», а также «Инструкции по санитарно-микробиологическому контролю производства пищевой продукции из рыбы и морских беспозвоночных» № 5319-91 от 22.02.91, утв. МЗ СССР и справочника «Санитарная микробиология» (1998 г.) Пробы для бактериологического исследования собирают до изъятия образцов для органолептического и химического анализа.
Порядок отбора, доставки и исследования материала от больного, проб воды и других объектов описан в методических указаниях МУК 4.2.1097-02 «Лабораторная диагностика холеры» и МУК 4.2.1793-03 «Лабораторная диагностика заболеваний, вызываемых парагемолитическими и другими патогенными для человека вибрионами».
4. Подготовка проб к исследованию
5. Схема бактериологического анализа
5.1. Исследование пищевых продуктов
Порядок исследования и содержание работы по этапам схематически представлены на рис. 1.
5.1.1. Отбор колоний и идентификация выделенных культур
На полиуглеводных средах отбирают культуры с типичным для парагемолитических вибрионов ростом. На среде Ресселя и Клиглера отмечают характерное для кислой реакции изменение цвета столбика при сохранении цвета скошенной части агара.
Культуры, выросшие на щелочном агаре, изучают на наличие цитохромоксидазы. Из оксидазопозитивных готовят мазки по Граму.
Для дальнейшей идентификации отбирают оксидазопозитивные грамотрицательные культуры с характерным ростом на полиуглеводных средах. Отобранные культуры изучают по набору признаков (подвижность, лизиндекарбоксилаза, аргининдигидролаза, индол, рост в средах с различными концентрациями натрия хлорида, ферментация/окисление глюкозы на среде Хью и Лейфсона (п. 7.2.1.8), арабинозы, сахарозы, целлобиозы, салицина, реакция Фогес-Проскауэра), методами, описанными в разделе 6 и методических указаниях МУ 4.2.1097-02 «Лабораторная диагностика холеры».
При расследовании случаев заболевания, обусловленных V. рагаhaemolyticus, выделенные культуры изучают по расширенному набору признаков, приведенному в табл. 1, а также по тестам внутривидовой дифференциации: серотипированию и феномену Канагава.
5.1.2. Обработка результатов
Количество парагемолитических вибрионов в 1 г продукта (N) в соответствии с ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96) «Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований» подсчитывают по формуле:
где Σа — сумма парагемолитических вибрионов, рассчитанная по формуле:
V- объём посевного материала, внесенного в каждую чашку, см 3 ;
Если в каждой из двух чашек, отобранных для подсчёта колоний, содержится их менее 15, то приближённое количество микроорганизмов в 1 г продукта ( NE ) рассчитывают по формуле:
Если две чашки не содержат колоний на уровне исходной суспензии, то результаты выражают следующим образом:
Доверительный интервал, характеризующий статистическое распределение микроорганизмов в пробе, рассчитывают в соответствии с ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96) «Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований».
5.2. Исследование воды поверхностных водоемов и
обитающих в ней гидрабионтов
Воду и гидробионтов исследуют качественным и количественным методами при проведении санитарно-эпидемиологического расследования.
5.2.1. Качественный анализ воды
5.2.2. Количественное исследование воды
Воду исследуют в объёмах 50, 10 и 1 мл в трёх параллельных пробах. Объёмы воды 10 мл и 1 мл засевают в 50 мл 1 %-й пептонной воды с 3 % NaCl (п. 7.2.1.3), а в пробы объёмом 50 мл добавляют 5 мл основного раствора пептона. Дальнейшее исследование всех проб проводят по схеме качественного анализа пищевых продуктов, представленной на рис. 1. По окончании идентификации выделенных культур подсчитывают число проб, из которых выделены парагемолитические вибрионы (положительный результат). В зависимости от различных комбинаций положительных и отрицательных результатов определяют наиболее вероятное число (НВЧ) парагемолитических вибрионов в 100 мл воды по таблицам Swaroop, опубликованным в методических указаниях МУК 4.2.671-97 «Методы санитарно-микробиологического анализа питьевой воды».
5.2.3. Исследование гидробионтов
Доставленные в лабораторию гидробионты исследуют по схеме, представленной на рис. 1.
5.3. Оценка результатов исследования объектов окружающей среды
При контроле пищевых продуктов на этапах их производства и реализации оценивают соответствие полученных результатов гигиеническим критериям их безопасности, предусмотренным санитарно-эпидемиологическими правилами и нормативами СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов».
В случае санитарно-эпидемиологического расследования вспышек, обусловленных парагемолитическими вибрионами, культуры этих микроорганизмов, выделенных из продуктов, морской воды и обитающих в ней гидробионтов изучают по тестам внутривидовой дифференциации. Доказательством роли объектов внешней среды, контаминированных парагемолитическими вибрионами, в возникновении заболевания является:
• обнаружение в объектах окружающей среды и от больных людей Канагава-позитивных V. parahaemolyticus ;
• выделение от больных, из пищевых продуктов, морской воды и обитающих в ней гидробионтов вибрионов идентичных серологических групп.
Объём и характер санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий в каждом конкретном случае с учётом полученных результатов определяют эпидемиологи и гигиенисты.
6. Методы изучения свойств парагемолитических вибрионов
6.1. Определение подвижности
Подвижность определяют при микроскопировании раздавленной капли с помощью фазово-контрастного устройства или посевом в 0,3 %-й агар, приготовленный из мясопептонного агара (МПА) с 3 % натрия хлорида (п. 7.2.1.5).
6.2. Определение цитохромоксидазы
Для постановки теста используют реактивы: 1 %-е водные растворы диметил-пара-фенилендиамина, тетраметил-пара-фенилендиамина (гидрохлорида) и пара-аминодиметиланилина (гидрохлорида или оксалата). Первые два реактива используют самостоятельно, последний в сочетании с 1 %-м спиртовым раствором а-нафтола.
6.3. Определение галофильности и солевой толерантности
Пептонную воду готовят из сухих компонентов без натрия хлорида и с внесением в нее необходимой навески соли.
Негалофильные вибрионы растут в отсутствии соли в среде. Галофильные вибрионы не растут в 1 %-й пептонной воде без добавления натрия хлорида и устойчивы к различным его концентрациям.
6.4. Выявление способности кроению
6.5. Биохимические тесты
Тип расщепления глюкозы, декарбоксилазную активность, ферментацию углеводов и спиртов, гидролиз мочевины, образование индола, сероводорода определяют с использованием общепринятых питательных сред, содержащих 1,5 % натрия хлорида.
6.6. Определение β-галактозидазы
6.7. Постановка реакции Фогес-Проскауэра
6.8. Определение нитратредуктазы
а) Суточную агаровую культуру засевают в 1 мл бульона Хоттин-гера с 0,1 % калия азотно-кислого. После 2-х суток инкубации при температуре (37 ± 0,5) °С в посевы добавляют 0,5 мл реактива Грисса. В положительных случаях среда сразу же окрашивается в красный цвет.
6.9. Серологическое типирование парагемолитических вибрионов
В основу серологической классификации парагемолитических вибрионов положены различия в строении О- и К-антигенов. Известно 12 типов термостабильного О-антигена и 68 термолабильного К-антигена. Каждый К-антиген сочетается с одним и тем же О-антигеном, образуя ту или иную серогруппу (табл. 2).
6.10. Определение патогенных свойств парагемолитических вибрионов
О патогенности парагемолитических вибрионов судят по способности вызывать гемолиз на среде Вагатцума (п. 7.2.1.10). Этот тест назван феноменом Канагава. По результатам тестирования штаммы делят на Канагава-положительные, образующие зону р-гемолиза и Канагава-отрицательные, не лизирующие эритроциты человека. Гемолиз на среде Вагатцума обусловлен способностью парагемолитических вибрионов продуцировать прямой термостабильный гемолизин, обладающий энтеротоксигенными свойствами.
7. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда,
питательные среды и тест-штаммы
7.1. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда
Перечень аппаратуры, оборудования лаборатории и требования к ним представлены в ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96) «Продукты пищевые. Общие правила микробиологического исследования».
7.2. Питательные среды и тест-системы для выделения и
идентификации парагемолитических вибрионов
7.2.1. Растворы и среды лабораторного изготовления
7.2.1.2. Раствор 0,1 %-й пептонной воды с 3% натрия хлорида (для подготовки проб к исследованию).
Ингредиенты перемешивают, подщелачивают 20 %-м раствором гидроокиси натрия до рН 8,5 ± 0,1. Варят в автоклаве текучим паром в течение 40 мин. Фильтруют через ватный фильтр. Устанавливают рН 8,0 ± 0,2 с помощью 18 %-го раствора соляной кислоты. Среду разливают в емкости и стерилизуют при температуре 112 °С в течение 20 мин.
7.2.1.3. Пептонная вода 1 %-я с 3, 6, 8, 10 % натрия хлорида (для определения солевой толерантности).
В воду очищенную вносят пептон ферментативный и требуемую навеску натрия хлорида. Подщелачивают 20 %-м раствором гидроокиси натрия до рН 8,6 ± 0,1. Варят текучим паром в автоклаве 40 мин или кипятят до растворения ингредиентов. Добавляют навеску калия нитрата, перемешивают, фильтруют через ватный фильтр и устанавливают рН с помощью 18 %-го раствора соляной кислоты.
7.2.1.4. Пептонная вода с ингибиторами (теллуритом калия или препаратом «Прогресс»).
7.2.1.5. Мясопептонный агар МПА с 3 % натрия хлорида.
7.2.1.6. Дифференциально-диагностический агар с пенициллином ДДА.
К стерильному расплавленному рыбо- или мясопептонному агару (рН 8,0), охлаждённому до 50 °С, добавляют указанные ингредиенты и, не стерилизуя, разливают в чашки Петри. Среда имеет сине-зелёный цвет, хранят в холодильнике до 14 суток.
7.2.1.7. Среда Ресселя.
7.2.1.8. Среда Хью-Лейфсона.
рН после стерилизации 7,2 ± 0,1.
К воде дистиллированной добавляют пептон ферментативный, натрия хлорид, калий фосфорно-кислый двузамещённый, агар микробиологический. Подщелачивают 20 %-м раствором гидроокиси натрия до рН 8,5 ± 0,1. Доводят до кипения и кипятят до расплавления агара и растворения ингредиентов. Фильтруют через ватный фильтр. Устанавливают рН 7,4 ± 0,1 с помощью 18 %-го раствора соляной кислоты. Добавляют глюкозу и 1 %-й водный раствор бромтимолового синего. Среду разливают в пробирки по 5,0 мл и стерилизуют при 112 °С 20 мин. Цвет среды после стерилизации травянисто-зелёный. При кислой реакции среда желтеет.
7.2.1.9. Среды для определения декарбоксилаз и дигидролазы аминокислот (Среды Мёллера.)
7.2.1.10. Среда Вагатцума для изучения гемолитической активности парагемолитических вибрионов.
Все компоненты растворяют при нагревании, но не стерилизуют, добавляют 1 г маннита, 0,1 мл 0,1 %-го спиртового раствора кристалл-виолета, 5 мл дефибринированной крови человека и разливают по чашкам.
7.3. Контроль питательных сред для выделения
парагемолитических вибрионов
В качестве ингибиторов роста используют теллурит калия, контроль которого описан в упомянутой выше инструкции, и препарат «Прогресс», обеспечивающий торможение роения протея и алгинолитических вибрионов.
Препарат «Прогресс» контролируют до и после его стерилизации при 0,5 атм. или кипячения на водяной бане в течение 20 мин.
7.4. Тест-штаммы
бактериологического исследования пищевых
продуктов на парагемолитические вибрионы
