мук 2661 10 исследование смывов на яйца гельминтов
Методические указания МУК 4.2.2661-10 «Методы санитарно-паразитологических исследований» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 23 июля 2010 г.)
Методические указания
МУК 4.2.2661-10
«Методы санитарно-паразитологических исследований»
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 23 июля 2010 г.)
1. Назначение и область применения
1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы лабораторного контроля за объектами окружающей среды (почва, вода, бытовые и ливневые стоки, их осадки, навоз и навозные стоки, предметы обихода и другие), а также для проведения сертификационных испытаний приборов, установок отечественного и импортного производства (например, биотуалеты, водоочистные устройства индивидуального и коллективного пользования и другие) по паразитологическим показателям и определения эффективности средств и методов дезинвазии.
Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих санитарно-паразитологический контроль факторов внешней среды, а также могут быть использованы лабораториями организаций, осуществляющих производственный контроль, и научных учреждений, занимающихся изучением особенностей эпидемиологии паразитарных болезней и научно обосновывающих мероприятия по охране окружающей среды от загрязнения и защите здоровья населения.
2. Нормативные ссылки
2.1. Федеральный закон от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2.2. Постановление Правительства Российской Федерации от 24 июля 2000 г. N 554 «Об утверждении Положения о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации и Положения о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании».
2.3. Постановление Правительства Российской Федерации от 30 июня 2004 г. N 322 «Об утверждении Положения о Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека».
2.5. СанПиН 3.2.1333-03 «Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации».
2.6. СанПиН 2.1.7.573-96 «Гигиенические требования к использованию сточных вод и их осадков для орошения и удобрения».
2.7. СанПиН 2.1.7.1287-03 «Санитарно-эпидемиологические требования к качеству почвы».
2.8. МУ 3.2.1756-03 «Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями».
2.9. МУ 2.1.7.730-99 «Гигиеническая оценка качества почвы населенных мест».
2.10. ГОСТ Р 17.4.3-01.83 «Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб».
2.11. ГОСТ Р 17.4.4.02-84 «Охрана природы. Почвы. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического и гельминтологического анализов».
2.12. ГОСТ Р 17.4.3.07-2001 «Охрана природы. Почвы. Требования к свойствам осадков сточных вод при использовании их в качестве удобрений».
3. Оборудование, расходные материалы, лабораторная посуда, реактивы
Шкаф вытяжной универсальный, обеспечивающий биологическую и химическую защиту
Холодильник электрический бытовой
Термостат электрический (ТС-80 или аналогичный)
Центрифуги для исследования почвы, иловых осадков, сточных вод, смывов напольные и (или) настольные
Стереоскопический микроскоп (типа МБС)
Люминесцентный микроскоп «ЛЮМАМ» или его аналог
Осветитель к микроскопу ОИ-19 или другой аналогичный
Столик нагревательный к микроскопу
Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности, максимальный предел взвешивания 200 г
Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности, максимальный предел взвешивания 1 кг
Аппарат для встряхивания
Денсиметры (ареометры типа I (A1) с пределами измерения от 1,000 до 1,600 кг/куб.м
Приборы вакуумного фильтрования ПВФ-142/Э или ПВФ-142/ЭМ, отборник флотанта фильтрующий «ОФФ-25» или эквиваленты
Пробоотборник-концентратор «ПробоКонГ-СЭС» или эквивалент
Часы песочные на 3 и 5 мин. или часы сигнальные
Дозаторы пипеточные П 1-0,1; П 1-0,5; П-1,0 мл или аналогичные со сменными наконечниками
3.2. Расходные материалы
Штативы лабораторные для пробирок
Совки, шпатели, ложки, лопаты, бур Некрасова
Пластиковые мешки и пакеты
Трековые мембраны с размером пор от 0,5 до 5 мкм
Резиновые груши разных размеров
Ножницы анатомические разных размеров
Счетная камера (для количественного учета яиц гельминтов)
Маркер (карандаш) по стеклу
Клеенка и фартук клеенчатый
Весы для уравновешивания центрифужных пробирок
Кюветы эмалированные разных размеров и почкообразные
Поплин, перкаль, сатин
Сита почвенные с сеткой 0,25; 0,5; 1; 3 мм
Калька и пергамент
Другие расходные материалы, в том числе перевязочные (вата, марля, разовые полотенца, салфетки и пр.)
3.3. Лабораторная посуда
Пробирки центрифужные градуированные (ПЦГ) емкостью 10, 50, 100 и 250 мл
Стекла предметные размером 25 x 75 мм; 60 x 120 мм
Стекла покровные размером 18 x 18; 24 x 24 мм
Чашки биологические (Петри)
Емкости для отбора проб воды, осадков, навоза и навозных стоков из нейтрального материала, пригодные для обеззараживания принятыми методами:
канистры пластмассовые емкостью 1; 2; 5; 20 и 25 л;
Цилиндры измерительные с носиком 1-00, 1-25, 1-500
Колбы 2-50-2, 2-100-2, 1-1000
Капельница для многократной дозировки по Манну
Широкогорлые стеклянные или пластиковые флаконы емкостью 100; 500; 1000; 2000 мл с притертыми или завинчивающимися крышками
Спиртовки лабораторные стеклянные
Стеклянные воронки разных размеров
Часовые стекла разных размеров
Пипетки градуированные от 1 до 10 мл
Банки стеклянные с притертыми или резиновыми пробками разных размеров до 500 мл
Банки стеклянные широкогорлые до 2 л
Банки фарфоровые без крышек 500 мл
Кружки фарфоровые с ручками разных размеров
Ступки и пестики фарфоровые разных размеров
Мензурки на 100; 250; 500; 1000 мл
3.4. Химические реактивы
Нитрат калия (калиевая селитра)
Кислота соляная с массовой долей 3%
Спирт этиловый ректифицированный технический
Сульфат цинка семиводный, х.ч.
Сульфат магния, ч.д.а.
Натрий хлористый, х.ч.
Изотонический раствор натрия хлористого с массовой долей 0,85% (физиологический раствор, жидкость Барбагалло)
Йод кристаллический, х.ч.
Метиленовый синий сухой, х.ч.
Кислота молочная, х.ч.
Пепсин (возможен искусственный)
Натрий двууглекислый, ч.д.а.
Бриллианткрезилблау синий (1:10000)
Раствор йода спиртовой 5%-ный
Толуидиновый синий (1:1000)
Сафранин (1:10000 спирта 10°C)
Раствор пирогалловой кислоты 50%-ный
3.5. Насыщенные растворы
3.5.1. Для методов флотации используют насыщенные растворы с заданной плотностью, которые следует готовить непосредственно перед применением (табл. 1). Количество солей на 1 л воды для различных насыщенных растворов приводится в табл. 3. В случае хранения готовых насыщенных растворов перед проведением исследований необходимо проверять их плотность ареометром (денсиметром). Насыщенные растворы с плотностью ниже требуемой не использовать.
Насыщенные растворы, используемые для методов флотации
Раствор нитрата натрия
нитрат натрия 1000 г
Раствор нитрата аммония или гранулированной аммиачной селитры
нитрат аммония 1500 г
через 24 часа снижается до 1,40
Раствор тиосульфата натрия (гипосульфита натрия)
3.5.2. Для приготовления насыщенных растворов насыпают соль в эмалированное ведро с горячей водой порциями при постоянном помешивании до полного растворения. Раствор доводят до кипения, пока не появится на его поверхности кристаллическая пленка. Приготовленный раствор после остывания переливают в другие крупные емкости (бутыли). О насыщенности раствора судят по наличию на дне сосудов кристаллов соли и (или) измеряют ареометром его плотность. Образующийся на дне сосуда осадок используют при следующем приготовлении насыщенного раствора.
4. Методы исследования почвы
4.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию
Периодичность (частота) санитарно-паразитологического исследования почвы зависит от цели лабораторного контроля.
Количество и размер пробных площадок на обследуемой территории закладывается с учетом эпидемиологической значимости объекта и его общей площади.
Отбор проб почвы для паразитологических анализов с целью оценки качественного состояния почв естественного и нарушенного сложения проводят не менее 1 раза в год.
При изучении динамики самоочищения почвы от яиц гельминтов, цист кишечных простейших отбор проб проводят в течение первого месяца наблюдений еженедельно, а затем ежемесячно в течение вегетационного периода до завершения активной фазы самоочищения.
Пробы помещают в банки с крышками или пакеты из клеенки, пластика, этикетируют с указанием места отбора, даты, глубины, характера исследуемого участка (в тени или на солнце, состав почвы, наличие растительности и т.д.). В этикетке обязательно разборчиво указывается фамилия и должность отборщика пробы и представителя учреждения, на территории которого отбирались пробы. Все объединенные пробы должны быть зарегистрированы в журнале, пронумерованы. В процессе транспортирования и хранения почвенных проб должны быть приняты меры по исключению возможности их загрязнения.
Перед исследованием объединенную пробу почвы рассыпают на бумаге или кальке, разминают пестиком крупные комки, выбирают из нее корни растений, камни, насекомых, стекло, уголь, кости животных и др. Затем почву переносят в ступку, растирают пестиком и просеивают через сито с ячейками диаметром 1 мм. Этот материал исследуют на яйца гельминтов и на цисты простейших.
4.1.1. При обнаружении возбудителей гельминтозов определяют:
— экстенсивный показатель загрязнения (отношение числа положительных проб к числу исследованных проб);
— интенсивный показатель загрязнения (общее количество возбудителей в 1 кг или 100 г почвы);
— категория загрязнения почв (чистая, умеренно опасная, опасная, чрезвычайно опасная) в соответствии с СанПиН 2.1.7.1287-03.
4.2. Исследование почвы на яйца гельминтов.
Метод Романенко (1996)
Для оценки результатов число яиц, обнаруженных в 4-х порциях пробы, умножают на 10, получая показатель содержания яиц в 1 кг исследуемой почвы.
Для определения истинной обсемененности почвы яйцами аскарид и власоглава необходимо использовать поправочные коэффициенты для различных типов почв (табл. 2), для чего необходимо определить тип почвы, а затем умножить число обнаруженных яиц гельминтов одного вида на коэффициент для этого типа почвы и для данного вида гельминта. Тип почвы должен быть определен при отборе проб и указан в сопроводительных документах.
Поправочные коэффициенты для определения истинной обсемененности почв яйцами аскарид и власоглавов
Чернозем каштановый (супесь)
Чернозем каштановый (суглинок)
Черноземная лесная коричневая
Горная лесная бурая
Для обнаружения в почве яиц гельминтов, имеющих более высокую плотность (яйца описторхов, клонорхов), чем яйца аскарид и власоглавов, следует использовать насыщенный раствор хлорида цинка (плотность 1,78); яйца токсокар лучше выявляются при обработке почвы насыщенным раствором сульфата цинка или сульфата магния в смеси с 5%-ным раствором йодата калия.
При работе по данной методике необходимо строго соблюдать следующие требования:
1. Обязательность применения обезжиренных предметных стекол.
В случае нарушения указанных требований, поверхностная пленка с яйцами гельминтов не прилипнет к стеклу, а скорость всплывания яиц гельминтов замедлится, и в указанные сроки они не достигнут поверхностной пленки.
Стекла протирают хлопчатобумажной тканью и помещают для обеззараживания в смесь Никифорова (из расчета 1 мл смеси на 1 стекло), где они могут храниться длительное время.
Извлеченные из смеси Никифорова стекла протирают хлопчатобумажной тканью, заворачивают в бумагу небольшими партиями и стерилизуют.
4.3. Исследование почвы на яйца гельминтов.
Метод Васильковой и Гефтер (1955)
Эта процедура повторяется 3 раза. После каждого центрифугирования раствор над уплотненным осадком сливают в отдельную емкость для дальнейшего фильтрования.
Раствор фильтруют через мембранные фильтры «Владипор» типа МФАС-СПА диаметром 35 мм фильтровальной установкой ПВФ-35/2. С фильтра делают соскоб осадка покровным стеклом в каплю 50%-ного раствора глицерина и микроскопируют.
4.4. Исследование почвы на личинки гельминтов.
Метод Бермана (1942)
4.5. Исследование почвы на личинки гельминтов.
Метод Супряга
Ход исследования. В химический стаканчик помещают 10 г почвы, заливают теплым (40°C) физиологическим раствором так, чтобы он полностью покрывал пробу. Через 20 мин. жидкость сливают в чашку Петри и исследуют под стереоскопическим бинокулярным микроскопом. По эффективности метод Супряга не уступает методу Бермана.
4.6. Дифференциальная диагностика личинок свободноживущих и паразитических нематод.
Метод Корта
4.7. Исследование почвы на цисты кишечных простейших.
Метод Падченко (1992)
Для приготовления мазков каплю исследуемой смеси осадка с консервантом после встряхивания наносят пипеткой на предметное стекло, смешивают ее с каплей акридинового оранжевого, разведенного 1:500, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым или люминесцентным микроскопом, подсчитывают число неокрашенных (живых) и окрашенных (мертвых и дегенерирующих) цист кишечных простейших каждого вида. При изучении исследуемого материала под световым микроскопом жизнеспособные цисты кишечных простейших остаются неокрашенными, а дегенерирующие и мертвые цисты окрашиваются в желтый цвет. Погибшие цисты под люминесцентным микроскопом полностью прокрашиваются и имеют красный цвет. Жизнеспособные накапливают краску на поверхности цисты и имеют вид светящихся колец красного цвета.
5. Исследование воды
5.1. Исследование воды питьевого и хозяйственно-бытового назначения, в том числе воды плавательных бассейнов и аквапарков
Исследование воды регламентируется методическими указаниями МУК 4.2.1884-04 «Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов» и МУК 4.2.2314-08 «Методы санитарно-паразитологического анализа воды».
6. Исследование бытовых и ливневых стоков
6.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию
Пробы сточных вод отбирают на входе и выходе с очистных сооружений (механическая очистка, аэро- и биостанции, компактные установки, биологические пруды, поля фильтрации), на полях орошения и в местах сброса их в поверхностные водоемы.
Пробы этикетируют, регистрируют в журнале и доставляют в лабораторию, где их хранят в прохладном месте не более суток. В этикетке обязательно разборчиво указывается фамилия и должность отборщика пробы и представителя учреждения, на территории которого отбирались пробы.
6.2. Исследование сточной воды на яйца гельминтов.
Метод Романенко (1996)
Смесь размешивают и центрифугируют, жидкость сливают, а осадок обрабатывают по методике Романенко для исследования почвы.
6.3. Исследование сточной воды на цисты кишечных простейших.
Метод Падченко (1992)
Жизнеспособные цисты кишечных простейших остаются в составе этих консервантов неокрашенными. Дегенерирующие цисты окрашиваются красителем в фиолетовый цвет. Эффективность метода в среднем 90%.
7. Исследование донных отложений и осадка сточных вод
7.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию
Пробы донных отложений отбирают в поверхностных водоемах выше, ниже и непосредственно в месте сброса в них сточных вод, их осадков, навозных стоков, а также в местах водозабора и попадания стоков с поверхности территорий населенных пунктов, индивидуальных и фермерских хозяйств.
Для отбора проб применяют различные системы пробоотборников: дночерпатели, драги и трубки различных конструкций. Отбор проб донных отложений ручным или механизированным способом проводят с берега или с различных плавсредств. Пробы объемом 200 г помещают в широкогорлые стеклянные или пластиковые емкости с крышками, этикетируют, регистрируют в журнале и доставляют в лабораторию, где их хранят в холодильнике. Требования к этикетированию такие же, как и к пробам почвы и воды (см. выше).
7.2. Исследование осадков сточных вод и донных отложений на яйца гельминтов.
Метод Романенко (1996)
Промывку обезвоженных (влажность 70% и ниже) осадков сточных вод проводят аналогичным способом при тех же технологических режимах, помещая в центрифужные пробирки объемом 250 мл по 25 г осадка и 150 мл чистой воды.
7.3. Исследование осадков сточных вод и донных отложений на цисты кишечных простейших.
Метод Падченко (1992)
8. Исследование навоза и навозных стоков
8.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию
8.2. Исследование навоза и навозных стоков на яйца гельминтов.
Метод Романенко и Черепанова
Ход исследования. В фарфоровую ступку помещают 100 г твердой фракции навоза, добавляют 900 мл воды и перемешивают. Полученную смесь навоза, так же как и пробу навозных стоков, фильтруют через двойной слой марли, уложенный на металлический каркас. Фильтрат переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 3 мин. при 1500 об./мин. Надосадочный слой сливают, а к осадку добавляют насыщенный раствор нитрата натрия и снова центрифугируют. После этого в пробирки добавляют тот же флотационный раствор (до образования мениска), покрывают обезжиренными предметными стеклами, а через 20 мин. их снимают и микроскопируют поверхностную пленку.
9. Исследование снега
9.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию
9.2. Исследование снега.
Метод Чернышовой (1996)
Ход исследования. В лаборатории осадок из мешочков смывают небольшим (0,5 л) количеством воды. Смывные воды разливают в пробирки объемом 250 мл и центрифугируют 15 мин. при 1500 об./мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок переносят на предметные стекла и микроскопируют.
10. Исследование смывов с поверхностей
10.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию
При определении обсемененности возбудителями паразитарных болезней предметов обихода смывы берут с посуды, скатертей или клеенок, мебели, ковров, нательного и постельного белья, халатов, спецодежды, ночных горшков, игрушек, дверей, парт, спортивного инвентаря, поручней, а также с рук детей, персонала детских учреждений, работников пищеблока, официантов, поливальщиков на оросительных системах с использованием сточных вод, их осадков, животноводческих стоков, персонала водоочистных и канализационных очистных сооружений.
Смывы берут в столовых, магазинах, детских дошкольных и школьных учреждениях, оздоровительных и спортивных лагерях, детских домах, лечебно-профилактических учреждениях, общежитиях, парикмахерских, плавательных бассейнах, спортивных залах, банях, фермах, теплицах, маслозаводах, мясокомбинатах, мастерских по выделке шкур и пошиву меховых изделий.
При взятии проб нужно соблюдать определенную очередность. Например, в детских учреждениях пробы вначале берут в пищеблоке, а затем в столовой, игровой комнате, спальне, умывальной и, в заключение, в санузле.
Для отбора смывов применяют кисточки из щетины, беличьи кисточки, смоченные в 1%-ном растворе едкого натра, или в 10%-ном растворе глицерина, или 1%-ном растворе стирального порошка. В центрифужные пробирки наливают до половины объема 10%-ный раствор глицерина. Для каждой группы предметов берут отдельную пробирку и кисточку, которые нумеруются (номер кисточки и пробирки должны совпадать). В одну пробу, то есть в пробирку, можно собирать смывы с нескольких однородных предметов.
Смывы с рук персонала берут у каждого отдельно, чтобы при обнаружении яиц гельминтов или (и) цист кишечных простейших можно было знать, какой именно сотрудник нарушает правила гигиены.
Для снятия яиц гельминтов с рук рекомендуется мыть их раствором питьевой соды или 1%-ным раствором едкого натра; смывные воды центрифугируют, осадок можно также профильтровать в аппарате Гольдмана и затем исследовать фильтры.
При взятии смывов с поверхностей кисточкой, смоченной в растворе, многократно и с нажимом проводят по поверхности однородных предметов обследуемого объекта (стулья, столы, подоконники, ручки дверей и др.). Причем кисточку в процессе отбора часто и тщательно ополаскивают в пробирке, и вновь делают смывы с поверхности предметов. Площадь исследуемой поверхности для одной пробы смывов составляет не менее 0,25 кв. м (0,5 x 0,5 м); для одной пробы смывов с однородных предметов обрабатывают не менее 10 тарелок, кукол, ручек дверей и пр.
После отбора проб пробирки с вложенными в них кисточками в штативах доставляются в лабораторию. Этикетирование целесообразно проводить не для каждой отдельной пробирки, а списком для штатива.
10.2. Исследование смывов на яйца гельминтов. Метод центрифугирования
Ход исследования. Кисточки со смывами ополаскивают в жидкости пробирки. Центрифугируют полученные пробы в этих же пробирках, надосадочную жидкость сливают. Осадок помещают на предметное стекло и микроскопируют. Плотный осадок делят на несколько предметных стекол.
10.3. Исследование смывов на яйца гельминтов
10.4. Исследование смывов на цисты простейших.
Метод Романенко
11. Исследование смывов с поверхностей инструментальным методом.
Метод Гузеевой (2008)
Метод предназначен и эффективен для исследования санитарно-паразитологического состояния больших площадей объектов санитарного надзора, перечисленных в п. 10.1 (больших площадей полов, дверей, предметов обихода, большого числа людей, например персонала или детей и т.п.), когда он дает значительное снижение трудоемкости по сравнению с методом тампонов и кисточек. Кроме того, возможность исследования больших площадей повышает надежность обнаружения возбудителей паразитарных заболеваний. Целесообразность применения именно этого метода определяет исполнитель исходя из вышеуказанных конкретных условий.
11.1. Инструментальное исследование паразитарной обсемененности помещений, мебели, полов, перил, постельных принадлежностей и спецодежды
Необходимое оборудование и материалы.
Паразитарные объекты при этом улавливаются порошковым фильтром прибора. Концентрат ПробоКонГа обрабатывают и исследуют на наличие паразитарных объектов как концентрат питьевой воды по МУК 4.2.2314-08.
11.2. Исследование паразитарной обсемененности пластмассовых и резиновых игрушек инструментальным методом
Необходимое оборудование и материалы.
11.3. Исследование групповой паразитарной обсемененности рук персонала и детей
Необходимое оборудование и материалы.
12. Исследование твердых бытовых отходов
12.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию
Пробы твердых бытовых отходов берут в коммунальных и индивидуальных домовладениях, детских дошкольных и школьных учреждениях, больницах (инфекционные отделения), мусоросортировочных и мусороперерабатывающих заводах.
Используют два способа отбора проб:
Пробы твердых бытовых отходов помещают в целлофановые пакеты, этикетируют, регистрируют в журнале и доставляют в лабораторию.
12.2. Исследование твердых бытовых отходов на яйца гельминтов
13. Исследование пыли и воздуха
13.1. Отбор проб, транспортировка, хранение и подготовка к исследованию
Сбор проб пыли и воздуха непосредственно на предметное стекло, покрытое клейкой смазкой, исключает использование фильтров, центрифугирование, приготовление мазков и другие действия, во время которых могут быть потери яиц гельминтов или нарушение их целостности. Кроме того, использование клейких стекол ускоряет время отбора проб и позволяет, что особенно важно, при обследовании детских учреждений, просматривать предметные стекла на местах обследования. Последнее дает возможность на местах составлять план мероприятий по предупреждению загрязнения и дегельминтизации внешней среды.
13.2. Исследование пыли и воздуха на яйца гельминтов.
Метод Каледина и Романенко (1982)
В лаборатории ленту отклеивают на участках микроскопирования и вносят под нее несколько капель касторового или вазелинового масла (для устранения пузырьков воздуха), исследуют при малом увеличении микроскопа. Препарат может храниться несколько дней.
14. Методы исследования компонентов экосистемы при санитарно-паразитологической оценке природных очагов
14.1. Исследование травы и водных растений на наличие адолескариев
Отбор проб. Материал для исследования растений на наличие адолескариев отбирают в биотопах моллюсков, осуществляя целенаправленный поиск. Для отбора проб водных растений с адолескариями желательно пользоваться лупой, хотя адолескарий можно заметить даже невооруженным глазом на листьях и стеблях растений. Адолескарии встречаются одиночно и группами. Их обнаруживают преимущественно на нижней и реже верхней поверхности листьев, черешках листьев и стеблях растений. Адолескарий фасциолы внешне представляет округлое образование диаметром около 0,3 мм, прикрепившееся к растению. Адолескарии парамфистомат сходны с таковыми фасциол, замечаются в виде блестящих черных или коричневых точек.
Для получения достоверных данных, характеризующих исследуемую экосистему, объем пробы околоводной и (или) водной растительности должен составлять не менее 300 г.
Морфология адолескариев. Описание личинок фасциол и парамфистомат представлено в табл. 3.
Морфология свободноживущих личинок (адолескариев) трематод
молодые адолескарии молочно-белого цвета, позднее желтеют, затем темнеют до буро-коричневого цвета
черные, коричневые, блестящие
почти одинаковые по размеру ротовая и брюшная присоски
брюшная присоска очень крупная, ротовая, наоборот,
рудиментарная или слабо развита
Органы, различимые при микроскопировании
глотка, два кишечных ствола, продолжающиеся до конца тела, экскреторный пузырь
глазки, глотка, экскреторные сосуды и пузырь
Активность живой личинки
14.2. Обнаружение и сбор адолескариев.
Метод Горохова
В лаборатории стекла микроскопируют. Ведут учет количества и состояния найденных личинок.
14.3. Исследование травы и сена на наличие личинок стронгилят.
Метод Котельникова (1991)
14.4. Исследование травы и сена на наличие личинок стронгилят.
Метод Акулина
Отбор проб. Метод позволяет исследовать пробы трав большой массы (более 1 кг), что увеличивает вероятность выявления личинок стронгилят.
Сита диаметром 31 см, высотой боковой стенки 12 см (сетка из нержавеющей проволоки, размер ячеек 1 мм, укрепляется на уровне 2 см от нижнего края сита).
Тазы диаметром 36 см (по верхнему краю), высотой 15 см, книзу таз имеет постепенное сужение.
14.5. Исследование моллюсков на зараженность шистосоматидами
Отбор проб. Роль промежуточных хозяев шистосоматид (T. ocellata) в средней полосе России в основном выполняют моллюски рода Lymnaea: L. auricularia, L. ovata, L. psilia psilia, L. balthica; в меньшей степени: L. stagnate, L. fragilis, L. palustris; относительно редко: L. intermedia, L. monnardi, L. fontinalis, L. atra. Основное значение (с учетом распространенности, плотности популяций, общей численности в водоемах разных типов, инвазированности возбудителями шистосоматид) имеют первые 4 вида.
Учитывая особенности биологии легочных моллюсков (сроки жизни не превышают 2 лет, период размножения приходится на начало лета, массовая гибель взрослых («прошлогодних») особей наблюдается в середине лета), моллюсков на зараженность шистосоматидами исследуют в первой трети летнего сезона. Моллюсков новой генерации («сеголеток») исследуют в последней трети летнего и начале осеннего периода.
Морфология церкарий T. ocellata
Тело церкарии прозрачное, слегка желтоватого цвета
Пять пар, колбовидной формы, хорошо видны выводные протоки
На дорзальной поверхности имеется два пигментированных глазка, расположенных немного впереди брюшной присоски
Стебель хвоста длиннее фурок. Утолщение в передней части стебля хвоста отсутствует
Мощная, хорошо заметна (особенно при боковом положении церкарий), может выпячиваться в виде «трубки»
Движения живых, вышедших из моллюсков в воду, церкарий энергичные, как бы «ввинчивающиеся в воду хвостом вперед». Двигаются в направлении «к свету» и почти мгновенно реагируют на изменения освещенности. Механические колебания воды и растительного субстрата, имитирующие движение лапок утки, стимулируют движения церкарий
В жизнеспособном состоянии постоянна
14.6. Разработка экспертного заключения об опасности природного объекта (водоема, пастбища) в отношении риска заражения людей паразитозами
Обследование природного объекта (водоема, серии водоемов, отдельных их зон, пастбища, урочищ и пр.) должно завершаться экспертным заключением: «Об опасности природного объекта в отношении риска заражения людей».
Для составления экспертного заключения необходима первичная информация, получаемая при комплексном обследовании водоема. Обследования проводят в середине дня при солнечной погоде (при условиях максимальной активности промежуточных хозяев и церкарий шистосоматид). Информацию по нижеприведенным показателям заносят в лабораторный журнал или компьютерную базу данных. Учитывают следующие показатели:
1. Географическое положение водоема и его название.
2. Дата проведения обследования и метеоусловия.
3. Тип водоема (одиночное озеро, одиночный пруд, система сообщающихся прудов или озер, участок реки, участок канала, система водоемов, образованных в результате зарегулирования русла реки, участок водохранилища, отстойник и др.).
4. Площадь обследуемой акватории.
6. Видовой состав легочных моллюсков, обнаруженных в водоеме и собранных для лабораторных исследований с целью определения пораженности церкариями шистосоматид.
7. Плотность популяций моллюсков (рассчитывается по среднему числу особей на 1 кв. м).
8. Число моллюсков, взятых для лабораторных исследований (указывать отдельно для каждого вида моллюсков).
9. Экстенсивность инвазии моллюсков шистосоматидами (число инвазированных от числа исследованных в процентах для каждого вида моллюсков).
10. Степень зарастания водоема (растительности нет; зарастание слабое (менее 10 стеблей на 1 кв. м); зарастание умеренное и сильное (более 10 стеблей на 1 кв. м); наличие плавающей растительности).
11. Характер фоновой растительности (учитываются: элодея, рдесты, осоки, роголистник, нимфеи, частуха, стрелолист, плавающая растительность (прежде всего, ряска), крупные макрофиты (тростник, камыш, рогоз, аир).
12. Наличие в водоеме утиных птиц (прежде всего, кряквы). Указывают численность птиц на момент обследования.
13. Степень загрязненности водоема (остатки пищи, остатки предметов быта, промышленные отходы, строительный мусор и др.). Водоем (его участок) загрязнен слабо: менее 3 указанных выше предметов загрязнения на 10 м прибрежной акватории шириной 3 м; водоем (его участок) загрязнен умеренно или сильно: более 3 предметов загрязнения в той же акватории.
14. Использование водоема в рекреационных целях («ДА», «НЕТ»; отдельно указывают: используется ли водоем или отдельный его участок как официально разрешенное место для купания людей).
15. Благоустроенность водоема: водоем полностью бетонирован, полностью или частично бетонирована береговая линия, производится или нет регулярная очистка от мусора и растительности, имеются или нет оснащенные пляжные территории и огороженные от остальных мест акватории для купания с песчаным грунтом без растительности, имеются или нет (на остальных береговых участках или в целом на несанкционированных для купания водоемах) знаки, запрещающие купание, подкормку птиц, свалку мусора.
На основании проведенных полевых и лабораторных исследований, составляют экспертное заключение об эпидемической опасности водоема (серии водоемов, отдельных их участков) в отношении риска заражения людей церкариозом. При этом делают вывод о том, что:
1) риск заражения отсутствует (либо: нет экологических условий, благоприятных для обитания промежуточных хозяев возбудителей и нет легочных моллюсков, либо: нет источника заражения, либо: отсутствуют оба эти фактора);
2) имеется потенциальный риск заражения (на исследуемой территории, в принципе, имеется источник инвазии (водоплавающие, прежде всего утиные, птицы) и имеются популяции промежуточных хозяев возбудителя (одного или нескольких видов легочных моллюсков). Однако на период обследования водоема в исследованной выборке моллюсков не выявлены особи, зараженные церкариями шистосоматид);
3) риск заражения присутствует (имеются популяции легочных моллюсков и в исследованной выборке обнаружены особи, зараженные шистосоматидами).
Во избежание ошибочного суждения о степени риска и, учитывая, что этот показатель изменчив в зависимости от целого ряда условий, определением «риск заражения присутствует», как правило, целесообразно ограничиться.
Когда ряд факторов со всей очевидностью указывает на высокий риск заражения в конкретных водоемах или их отдельных участках (обнаружена высокая численность популяций промежуточных хозяев, выявлена высокая пораженность моллюсков церкариями шистосоматид, имеется обильное зарастание водоема при одновременно его слабо выраженной загрязненности, водоем фактически используется для купания, особенно детьми, даже в тех случаях, когда он официально не признан рекреационной зоной), в экспертном заключении этот факт следует особо подчеркивать.
15. Методы определения жизнеспособности яиц и личинок гельминтов
Жизнеспособность яиц гельминтов определяют по внешнему виду, путем окрашивания витальными красками, культивированием в оптимальных условиях и постановкой биологической пробы.
15.1. Определение жизнеспособности яиц или личинок гельминтов по внешнему виду
Яйца гельминтов микроскопируют вначале при малом, затем при большом увеличении. У деформированных и мертвых яиц гельминтов оболочка разорвана или прогнута внутрь, содержимое мутное, разрыхленное. У нежизнеспособных яиц, содержащих шары дробления (бластомеры) разного размера, неправильной формы, часто сдвинуты к одному полюсу. Иногда встречаются аномальные яйца, которые, имея внешние уродства, развиваются нормально. У живых личинок аскарид мелкая зернистость имеется только в средней части тела, по мере их гибели она распространяется по всему телу, появляются крупные блестящие гиалиновые вакуоли, так называемые «нити жемчуга».
Для определения жизнеспособности зрелых яиц аскарид, власоглавов, остриц следует нагреть препарат до температуры не выше 37°C, чтобы вызвать активные движения личинок.
Жизнеспособность личинок аскарид и власоглавов удобнее оценивать после их высвобождения из скорлупы яйца, которое достигается надавливанием на покровное стекло препарата препаровальной иглой или пинцетом.
Для определения жизнеспособности яиц карликового цепня наиболее проста методика Иониной Н.С.: у живых яиц медианная пара эмбриональных крючьев или параллельна латеральным, или последние образуют с медианной парой угол у основания меньше 45°. У мертвых яиц латеральные пары образуют у основания угол с медианной парой больше 45° или же крючья беспорядочно разбросаны (утрачивается их парное расположение); иногда наблюдается сморщивание зародыша, образование зернистости.
Жизнеспособность адолескариев фасциол, собранных на растениях и других объектах водоемов, проверяют исследованием их на предметном стекле в физиологическом растворе под микроскопом с нагревательным столиком. При подогревании личинки трематоды, находящиеся в цисте, начинают двигаться.
15.2. Определение жизнеспособности личинок анкилостомид и стронгилид.
Метод Фюллеборна
15.3. Определение жизнеспособности личинок анкилостомид и стронгилид.
Метод Харада и Мори
Пробирки помещают в горячую водяную баню при температуре 50°C на 15 мин., после чего содержимое их встряхивают и быстро переливают в пробирку емкостью 15 мл для осаждения личинок. После центрифугирования надосадочную жидкость удаляют, а осадок переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопируют при малом увеличении.
Для дифференциального диагноза филяриевидных личинок необходимо пользоваться данными табл. 5.
Дифференциальная диагностика филяриевидных личинок A. duodenale, N. americanus, S. stercoralis, Trichostrongylus sp.
Длина тела около 660 мкм,
Исчерченность чехлика менее выражена, ротовой выступ менее заметен, передний конец тела (но не чехлика) тупой, диаметр кишечной трубки меньше, чем бульбус пищевода, хвостовой конец тупой
Длина тела около 590 мкм,
Чехлик заметно исчерчен, особенно в хвостовой части тела, ротовой выступ кажется темным, передний конец тела (но не чехлика) закруглен подобно узкому концу куриного яйца, передняя часть кишечной трубки такого диаметра, как бульбус пищевода, хвостовой конец резко заострен
Длина тела около 500 мкм
Личинка без чехлика, пищевод составляет около половины длины тела, хвост тупой или разветвленный
Длина тела около 750 мкм
Просвет кишечника не прямой, а зигзагообразный, хвостовой конец закруглен и имеет форму кнопки
15.4. Определение жизнеспособности яиц и личинок гельминтов методом окрашивания
Мертвые ткани в большинстве случаев воспринимают краски быстрее, чем живые. Эти особенности используют в гельминтологии для определения жизнеспособности яиц и личинок гельминтов. Однако в отдельных случаях некоторые краски лучше воспринимаются живыми тканями, чем мертвыми.
Для дифференциального определения живых и мертвых яиц и личинок применяют следующие краски и способы.
Для окраски живых и мертвых тканей часто используют лейкобазу метиленового синего. Живая клетка или ткань редуцирует метиленовый синий в бесцветную лейкобазу, мертвая ткань не обладает такой способностью, поэтому приобретает окраску.
Критерием состояния яйца является окрашивание зародыша, но не оболочки. Такая его способность связана с условиями гибели яйца. В тех случаях, когда волокнистая оболочка в мертвом яйце не теряет свойств полупроницаемости, она не будет пропускать красители, следовательно, мертвый зародыш не будет окрашиваться. Окрашенный зародыш всегда свидетельствует о гибели яйца.
Для определения жизнеспособности яиц карликового цепня рекомендуется использовать следующие краски:
15.5. Определение жизнеспособности яиц и личинок гельминтов люминесцентным методом
Люминесцентная микроскопия дает возможность дифференцировать живые и мертвые объекты без повреждения яйца. Для флюоресценции используются не ультрафиолетовые лучи, а сине-фиолетовая часть видимого света, с обычным микроскопом и предметными стеклами; к осветителю микроскопа добавляют специальный набор цветных фильтров.
Живые и мертвые яйца аскарид, остриц, карликового цепня, бычьего цепня, лентецов и других гельминтов люминесцируют неодинаково. Это явление наблюдается как при первичной люминесценции без применения красителей, так и при окраске флюорохромами (акридиновый оранжевый, корифосфин, примулин, аурамин, сульфат берлерина, трипафлавин, риванол, акрихин и др.)
Непигментированные и несегментированные живые яйца остриц и карликовых цепней излучают зеленовато-желтый свет, у мертвых яиц интенсивно люминесцирует оболочка на фоне темно-зеленой зародышевой массы.
При вторичной люминесценции (при окраске акридиновым оранжевым в разведении 1:10000 и 1:50000 от 30 мин. до 2 ч) оболочка живых и мертвых нематод, трематод и цестод люминесцирует неодинаково.
Скорлупа живых и мертвых яиц аскарид, токсокар, остриц, карликового, крысиного, бычьего цепней, лентецов окрашивается в оранжево-красный цвет. Зародыши живых яиц аскарид, токсаскарид, крысиного цепня, широкого лентеца и онкосферы бычьего цепня люминесцируют тусклым темно-зеленым или серо-зеленым цветом. Мертвые зародыши яиц этих гельминтов излучают «горящий» оранжево-красный цвет. Живые личинки остриц и токсокар (освобожденные от скорлупы яйца) излучают тусклый серо-зеленый свет, при их гибели цвет изменяется от головного конца в «горящий» светло-зеленый, затем желтый, оранжевый и, наконец, в ярко-оранжевый.
Живые яйца трематод (парагонимов и клонорхов) не люминесцируют после окраски акридиновым оранжевым, а от мертвых яиц исходит желтовато-зеленый цвет.
15.6. Определение жизнеспособности яиц и личинок гельминтов методом биологической пробы
Если животных заражали живыми инвазионными яйцами, то при вскрытии в печени и легких обнаруживают мигрирующие личинки аскаридат.
15.7. Определение жизнеспособности яиц описторхов.
Метод Германа и Беэра (1984)
Метод основан на физико-химической активации железы вылупления мирацидия и стимуляции двигательной активности личинки, что приводит к открыванию крышечки яйца и активному выходу мирацидия.
16. Методы экспериментального изучения сроков развития и выживаемости возбудителей паразитозов в окружающей среде
16.1. Выживаемость яиц гельминтов в различных условиях окружающей среды
При изучении сроков развития и выживаемости яиц гельминтов требуется проведение специальных экспериментов с искусственной закладкой проб на различных объектах окружающей среды. Опыты необходимо проводить, с одной стороны, в условиях наиболее приближающихся к естественным, а с другой, при которых пробы с яйцами гельминтов сохранялись бы в окружающей среде и их легко было бы извлекать для исследования в любые сроки.
16.1.1. Почва как среда обитания возбудителей паразитозов. На поверхности почвы закладку яиц гельминтов проводят одним из следующих способов:
При изучении сроков выживаемости яиц гельминтов в почве на разных глубинах (5, 10, 20, 40, 60 см) закладку их целесообразно проводить в специальных пробах.
Приготовление тест-объектов. Для приготовления тест-объектов используют крупные алюминиевые или пластмассовые бигуди, применяемые для завивки волос. Такой каркас удобен тем, что со всех сторон доступен для почвенного воздуха, влаги, почвы; кроме того, он может долго пролежать в земле, а при выкапывании предохраняет пробу почвы от разрушения. Каркас взвешивают, заполняют исследуемой почвой и снова взвешивают, по разности полученных показателей определяют массу почвы.
Необходимое для внесения в тест-объект количество капель взвеси определяют по формуле:
— масса упаковки-контейнера без почвы;
— масса упаковки с почвой;
16.1.3. Твердые поверхности как среда обитания возбудителей паразитозов. Яйца гельминтов (не менее 1000) наносят непосредственно на исследуемые поверхности (в т.ч. овощей, плодов и пр.). Сроки их нахождения на поверхностях определяют временем роста последних. Опытные поверхности помечают, а через определенные временные интервалы смывы с них забирают на исследование, помещают на фильтр. С мягкой поверхности (овощи) пробу отбирают скальпелем на фильтр и помещают во влажную камеру для развития их в оптимальных лабораторных условиях.
16.2. Выживаемость цист кишечных простейших в различных условиях окружающей среды
16.2.1. Почва как среда обитания простейших. Для проведения экспериментальных исследований по изучению сроков выживаемости цист патогенных кишечных простейших следует использовать цисты лямблий. При наличии одинаковых микроклиматических условий в окружающей среде, цисты лямблий не отличаются по своей устойчивости от таковой цист дизентерийных амеб. Цисты лямблий выделяют из фекалий больных людей методом механического обогащения.
У живых цист наблюдается свечение оранжевым цветом оболочки, а цитоплазма не прокрашивается. Цитоплазма и оболочка у погибших цист окрашивается в красный или красно-оранжевый цвет.
При отсутствии в лаборатории люминесцентного микроскопа идентификацию жизнеспособных и нежизнеспособных цист кишечных простейших осуществляют под световым микроскопом в препаратах, окрашенных акридиновым оранжевым. Препараты готовят в этом случае по той же методике, что и при люминесцентной микроскопии. Под световым микроскопом жизнеспособные цисты кишечных простейших остаются неокрашенными, а мертвые приобретают желтую окраску.
О динамике отмирания цист судят по изменению количественного соотношения между жизнеспособными и погибшими цистами.
Жизнеспособность цист определяют при помощи методов витального окрашивания и люминесцентной микроскопии.
17. Методы испытания и отбора препаратов для дезинвазии
17.1. Изучение овицидной активности различных средств
Основными условиями экспериментальной работы по определению овицидной активности химических препаратов должны быть: тщательное планирование, последовательность проведения опытов и их серий, выбор оптимальной концентрации химических веществ и экспозиции, оптимальная среда для испытуемого средства, правильное определение жизнеспособности яиц.
На стадии подготовки эксперимента устанавливают концентрацию испытуемых препаратов, планируемую экспозицию и стадию развития яиц.
Во второй серии опытов испытывают выявленные эффективные препараты на яйца гельминтов в фекалиях. На дощечку (дерево, цемент) размером 10 x 15 см наносят 0,5 г фекалий, обсемененных яйцами гельминтов (5 яиц на 1 куб. см). Рабочие растворы или эмульсии испытуемых веществ наносят на дощечки с помощью пульверизатора из расчета 1 л/кв. м. Контрольные дощечки поливают водой. Исследования наиболее часто проводят при экспозиции от 30 до 180 мин. Затем фекалии собирают, промывают водой, выделяют яйца гельминтов и культивируют их в термостате. После определения их жизнеспособности устанавливают эффективность испытуемого средства.
Перед тем, как перейти к дальнейшей апробации выявленных овицидов определяют их токсичность и коррозионную активность.
Во 2-й серии опытов экспозиция увеличивается до 60 мин.
В производственных условиях оценку препаратов проводят по результатам дезинвазии помещений. Производственные опыты осуществляют в микроочагах гельминтозов. Составляют план-схему, в которой предусматривают место и количество обрабатываемой площади, концентрацию и норму расхода рабочего раствора препарата, экспозицию, количество проб почвы, которое необходимо взять до и после обработки объекта.
Следующую серию опытов осуществляют с активными овицидами по такой же методике, но в почву при этом закладывают пробы фекалий, обсемененные яйцами гельминтов (извлеченные из концевых отделов маток гельминтов или полученные из фекалий зараженных животных). У наиболее перспективных овицидов определяют токсические и коррозионные свойства.
Оценку степени эффективности овицидных средств в почве проводят так же, как и препаратов, испытываемых на твердых поверхностях. Различия обусловлены особенностями объекта обеззараживания и свойствами испытуемого средства. Препарат оценивается по его способности вызывать гибель зародышей гельминтов в различных слоях почвы. С этим же связано и увеличение экспозиции опыта.
17.2. Определение овицидной и ларвицидной эффективности различных средств
Эффективность воздействия химических и других средств на яйца и личинки гельминтов рассчитывается по результатам экспериментов по формуле Симонова А.П.:
— количество живых яиц гельминтов в опыте;
— количество живых яиц гельминтов в контроле;
— количество яиц, взятых для определения их жизнеспособности, в опыте;
— количество яиц, взятых для определения их жизнеспособности, в контроле;
— процент погибших яиц в опыте;
— процент живых яиц в опыте;
17.3. Изучение протистоцидной активности различных соединений
Результаты изучения протистоцидной активности химических и других соединений используют при определении эпидемической значимости того или иного фактора передачи и разработке способов обезвреживания от цист патогенных кишечных простейших различных объектов окружающей среды.
Широкое распространение паразитарных болезней среди людей и животных способствует интенсивному обсеменению окружающей среды их возбудителями (яйцами аскарид, власоглавов, токсокар, онкосферами тениид, цистами амеб, лямблий, балантидиев, ооцистами криптоспоридий и др.). Возбудителей инвазий обнаруживают в почве, воде, предметах обихода, овощах, столовой зелени (абиотическая среда), в организмах окончательных, промежуточных и дополнительных хозяев (биотическая среда).
Санитарно-оздоровительные и профилактические мероприятия с обеззараживанием источников инвазии и строгим лабораторным контролем за работой сооружений по подготовке питьевой воды, очистке сточных вод и животноводческих стоков, обезвреживанием нечистот, осадков сточных вод перед сбросом в поверхностные водоемы или на поля для удобрения и орошения сельскохозяйственных культур в современных условиях являются ведущими в обеспечении санитарно-эпидемиологической безопасности среды обитания человека.
Лабораторный санитарно-паразитологический контроль является основным и часто единственным способом установить степень риска заражения населения возбудителями гельминтозов и кишечных протозоозов. На основе анализа показателей степени загрузки объектов окружающей среды инвазионным материалом, динамики инвазированности и заболеваемости населения, пораженности эпидемически значимых групп животных прогнозируются направленность и условия изменения риска заражения населения как по отдельным инвазиям, так и по группам паразитозов.
Результаты лабораторных санитарно-паразитологических исследований позволяют оценивать обсемененность окружающей среды возбудителями паразитозов, риск новых заражений, прогнозировать заболеваемость населения и, на основе этого, планировать санитарные, противоэпидемические и лечебно-профилактические мероприятия, а также контролировать их эффективность.
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!
Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.
Приведены Методические указания «Методы санитарно-паразитологических исследований» (МУК 4.2.2661-10).
Требования указаний применяются при определении методов лабораторного контроля за объектами окружающей среды, а также в ходе сертификационных испытаний приборов, установок отечественного и импортного производства по паразитологическим показателям и определения эффективности средств и методов дезинвазии.
Указания предназначены для органов и учреждений Роспотребнадзора, а также могут использоваться лабораториями организаций, осуществляющих производственный контроль, и научными учреждениями, занимающимися изучением особенностей эпидемиологии паразитарных болезней.
Методические указания МУК 4.2.2661-10 «Методы санитарно-паразитологических исследований» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 23 июля 2010 г.)
Текст методических указаний официально опубликован не был
1. Подготовлены: ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского ММА им. И.М. Сеченова; кафедра паразитологии, паразитарных и тропических болезней МПФ ППО ММА им. И.М. Сеченова; Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора; Центр паразитологии Института проблем экологии и эволюции имени А.Н. Северцова РАН; Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии Роспотребнадзора; ФГУЗ ЦГиЭ в г. Москве; ВИГИС; Курский государственный университет; ФГУЗ ЦГиЭ в Ханты-Мансийском автономном округе; ФГУЗ ЦГиЭ в Тульской области
2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 23 июля 2010 г.
3. Введены взамен методических указаний «Методы санитарно-паразитологических исследований» МУК 4.2.796-99