Рыбы могут в течение всей жизни быть носителем того или иного возбудителя, но не иметь клинических признаков. Восприимчивые виды разными способами могут перенимать паразитов от заболевшей рыбы или других промежуточных хозяев (гидробионтов и рыбоядных птиц) и гибнуть. Если инвазионное заболевание протекает в легкой форме, не исключается присоединение к ней более серьезных заболеваний бактериального и вирусного характера.
Черные цисты с личинками трематоды на теле леща. Фото: ВНИИПРХ.
Некоторые возбудители заболеваний рыб могут быть опасными для теплокровных животных и человека, т.е. имеют эпидемиологическое значение. В связи с этим не стоит забывать о том, что рыбаки-любители, вылавливая зараженную рыбу из водохранилищ, могут подвергать опасности себя и своих близких.
Паразитологический анализ рыб, проводимый при исследовании естественных водоемов, позволяет вовремя выявить состав паразитофауны в данном водном объекте, оценить эпизоотическую и эпидемиологическую ситуацию.
На базе лаборатории ихтиопатологии ВНИИПРХ в рамках государственного задания 5.1.8 «Сбор информации о качестве водных биоресурсов и продуктов их переработки на основании законодательства Российской Федерации» ведется ихтиопатологический анализ рыб из водохранилищ Курской, Тульской, Московской и Тамбовской областей.
Были обследованы такие рыбы, как щука, окунь, ерш, судак, плотва, красноперка, лещ, густера и чехонь.
Были выявлены следующие систематические группы паразитов – простейшие (микроспоридии и миксоспоридии), гельминты (моногенеи, метацеркарии и мариты трематод, цестоды, нематоды, скребни, пиявки), паразитические ракообразные (эргазилюсы и ахтерусы).
По мнению ученых, им в этот раз достался интересный материал для исследований, и самой яркой и важной находкой оказались гельминты, обнаруженные у окуневых и карповых рыб в водохранилищах Московской области.
Apophallus muehlingi – метацекарии трематод, паразитирующие в коже и лучах плавников, но рыбы являются лишь промежуточными хозяевами. В половозрелой стадии трематоды паразитируют в тонком отделе кишечника теплокровных млекопитающих и рыбоядных птиц.
Тупиковым резервуаром апофалюсов является человек, в организме, которого они не достигают половозрелой стадии и не откладывают яйца, но вызывают поражение слизистой тонкого отдела кишечника. Апофаллоз может длиться от нескольких дней до нескольких лет, завися от состояния иммунитета человека.
Материал подготовили сотрудники лаборатории ихтиопатологии ВНИИПРХ Анна Вовк, Данила Сафронов и Антонина Вишторская.
Прилавки рынков и магазинов радуют глаз: морская и речная рыба разных пород представлена в изобилии – свежая, мороженная, копченая, соленая, консервированная… Рыбу даже можно купить прямо у рыбаков: если Вы ехали по трассе Барнаул – Горно-Алтайск, наверное, видели огромных вяленных лещей, висящих на перекладинах. Однако мало кто знает, что в одной такой рыбине может находиться до 7000 личинок описторхов. Личинки эти в рыбе не заметны – они микроскопичны, но опасность от этого меньше не становится… Нам, жителям Западной Сибири, об описторхозе надо знать всё, ведь мы живем в самом напряженном очаге описторхоза на планете.
Итак, рыбы повинны в том, что люди болеют описторхозом. И не просто рыбы, а речные рыбы карповых пород – лещ, карась, карп, сорожка, чебак (язь), линь, пескарь, гольян, жерех и т.д. В некоторых водоемах Западной Сибири вся карповая рыба заражена описторхозом. По внешнему виду рыба выглядит нормально, так как личинок можно обнаружить, если под микроскопом просмотреть мышечную ткань рыб.
Моя знакомая заразилась описторхозам в гостях – не смогла удержаться при виде аппетитного вяленого леща. На следующие сутки она почувствовала тошноту и дискомфорт в животе. В это же время поднялась температура. Через неделю, не почувствовав улучшения, пошла к врачу. В общем анализе крови у заболевшей женщины нашли повышенное содержание эозинофилов. Как часто делается в таких случаях, врач назначил лабораторные анализы на гельминтозы, в том числе методом ИФА (иммуноферментный анализ). В сыворотке крови обнаружился высокий титр антител к описторхам. После лечения билтрицидом все симптомы прошли.
Диагноз ставится при обнаружении яиц описторхов в фекалиях больного или при обнаружении антител к описторхам в сыворотке крови. Сейчас описторхоз лечиться легко (курс лечения билтрицидом рассчитан на 1 день), но лучше лечиться в больнице, так как одновременно с назначением препарата проводят процедуры, чтобы удалить погибших описторхов из печени.
Итак, нашу речную рыбу надо есть с осторожностью – варите уху или жарьте рыбку в течение 20 минут. Остальные способы приготовления (копчение, посол, просушка) не убивают возбудителей описторхов.
Кошки и собаки тоже болеют описторхозом.
Неслучайно одно из названий описторха – кошачья двуустка
О других рыбных паразитах
Кроме личинок описторха в рыбе могут находиться и другие опасные паразиты. Несколько слов скажем и о них.
На Дальнем Востоке в речной рыбе находится двоюродный брат описторха – клонорх, который поражает тоже карповую рыбу, живущую в бассейнах рек Амура и Уссури. Там же можно в рыбе встретить еще одного паразита, опасного для человека – метагонимуса.
Опасны ракообразные – раки, креветки, крабы, живущие в пресноводных водоемах Дальнего Востока и стран Юго-Восточной Азии. Если съесть их без термической обработки, они вызывают парагонимоз, протекающий с поражение легких, головного мозга и других органов. От этого заболевания больные нередко погибают. Пишу это, потому что сейчас наши люди выезжают на отдых за рубеж, пробуя без всякого страха экзотические местные блюда. Вряд ли они отдают себе отчет, что подобные кулинарные изыски могут иметь очень неприятные последствия для здоровья.
Совет один – рыбу и рыбопродукты можно употреблять только после термической обработки! А суши и роллы (с сырой рыбой) – не наша еда…
(c) Управление Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Республике Алтай, 2006—2015 г.
Все права на материалы, размещенные на сайте, охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе об авторском праве и смежных правах. При использовании материалов сайта необходима ссылка на источник
Сейчас 401 гостей онлайн
Адрес: 649002, Республика Алтай, г. Горно-Алтайск, проспект Коммунистический, 173
Филиал ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» в ЗАО города Москвы предлагает проведение обследования на гельминтозы – исследование фекалий на наличие яиц гельминтов, идентификацию фрагментов гельминта. Материал для исследования доставляется по адресу: г. Москва, ул. Б. Филевская, д.33. Телефон для справок:8(495)443-21-15, 443-97-15.
Рыба и продукты ее переработки занимают существенное место в питании человека. Рыба содержит полноценный белок, микроэлементы, витамины, ненасыщенные жирные кислоты, необходимые для нормальной жизнедеятельности человека. Вместе с тем речные и морские рыбы, а также ракообразные и некоторые беспозвоночные могут быть заражены гельминтами, опасными для человека. Коварство ситуации заключается в том, что внешние признаки, свидетельствующие о наличие в рыбе таких паразитов, отсутствуют. В этих случаях рыба является лишь переносчиком серьезных заболеваний, поражающих людей, домашних и диких животных, питающихся рыбой, например кошек, собак, медведей, рыбоядных птиц, в частности чаек.
Многие считают, что кулинарная обработка портит вкусовые качества рыбных продуктов. И хотя это помогает сохранить ее питательную ценность, однако увеличивается вероятность выживания возбудителей болезни. Приготовление рыбы в микроволновой печи в течение короткого времени, слабый посол или слабое маринование, недостаточная термическая обработка с последующим копчением могут привести к заражению паразитами, содержащимися в рыбе.
Трудно изменить укоренившиеся привычки и традиции населения во многих районах России, Украины, Казахстана употреблять в пищу малосоленую и вяленую плотву (воблу, чебака, тарань), леща, ельца, окуня, красноперку, линя и др., а также малосоленую икру щуки, окуня, сиговых пород рыб, дальневосточных лососевых (кеты, горбуши). Традиционным блюдом для населения северных районов России стала сырая мороженая рыба, используемая в пищу без предварительной термической обработки. В виде строганины используют преимущественно сиговых рыб, реже лососевых и карповых.
Заражение населения Российского Приамурья, стран Дальнего Востока (Китай, Корея, Япония) и Юго-Восточной Азии (Лаос, Вьетнам, Таиланд) происходит преимущественно при употреблении в пищу салата из свежей сырой рыбы и уксусом и пряными зелеными овощами.
Заражаются не только местные жители, проживающие в очагах распространения гельминтозов, но и приезжающие сюда туристы, геологи, летчики, строители и т.д.
Одними из наиболее распространенных гельминтозов, передающихся от рыб, являются сосальщики: описторхоз и клонорхоз. Очаги описторхоза находятся в бассейнах Оби, Иртыша, Волги, Камы, Днепра, Енисея, Урала, Северной Двины. В Московской области встречаются в Луховицком, Коломенском, Серпуховском, Шатурском районах, населенные пункты которых расположены на берегах рек Оки, Клязьмы, Москвы. Очаги клонорхоза находятся в бассейне реки Амура, в странах Восточно-Азиатского региона. Описторхисы и клонорхисы паразитируют в желчных протоках печени и поджелудочной железы человека, домашних животных (кошки, собаки) и некоторых диких млекопитающих (лисы, норки, ондатры и др.) Заражение происходит при употреблении в пищу сырой, слабо проваренной, недожаренной, малосоленой пресноводной рыбы карповых пород (язь, плотва, чебак, лещ, красноперка и другие).
Клинические проявления описторхоза и клонорхоза характеризуются неспецифичностью и полиморфизмом симптомов. Заболевание начинается через 2-3 недели после употребления рыбы: общая слабость, головная боль, повышение температуры до 38-40 градусов, тошнота, боли в правом подреберье. Острая фаза заболевания затем переходит в хроническую стадию с симптомами хронического холецистита, дуоденита, панкреатита.
Лабораторная диагностика описторхоза и клонорхоза основана на паразитологическом исследовании и выявлении яиц гельминтов в фекалиях. Иммунологические методы диагностики (ИФА) недостаточно специфичны и чувствительны, применяются как дополнение к паразитологическим методам.
Другим известным и повсеместно распространенным гельминтозом является дифиллоботриоз – поражение широким лентецом. На территории России основные очаги дифиллоботриоза расположены на Волге, реках Сибири, Дальнего Востока и севера Европейской части России. Источником заражения являются окунь, ерш, щука, налим, дальневосточные лососевые, сиговые. Болезнь возникает при употреблении в пищу свежемороженой, слабосоленой и вяленой рыбы, слабосоленой щучьей и окуневой икры. В организме человека через месяц развивается взрослый паразит, который достигает длины 8-12 м и более. На первый план в клинике дифиллоботриоза выступают поражение желудочно-кишечного тракта: изменение аппетита, тошнота, слюнотечение, отрыжка, отхождение части стробилы гельминта. При длительном паразитировании развивается В 12 дефицитная анемия.
Лабораторная диагностика заключается в выявлении яиц или фрагментов гельминта в фекалиях.
Человек заражается не только от речных, но также и от морских рыб. Наиболее опасным гельминтозом является анизакидоз.
Возбудитель болезни — личиночная стадия круглых червей — анизакид. Поражаются практически все виды морских рыб (тресковые, сельдевые, окуневые, лососевые и другие). Уровень пораженности рыб анизакидами довольно высок. В частности, сельдевых в Балтийском море около 30%, в Северном море достигает 55-100%. В настоящее время во всем мире широкое распространение получили японские блюда, приготовленные из сырой рыбы (суши, сашими), и соответственно увеличился риск распространения анизакидоза среди населения других стран. Человек заражается при употреблении в пищу сырой или недостаточно термически обработанной рыбы и водных беспозвоночных (кальмаров, осьминогов, креветок, моллюсков). Клинические проявления характеризуются развитием острых язв стенок желудка или тонкого кишечника.
Диагноз устанавливается при эндоскопических исследованиях и биопсии или во время хирургических операций.
Помните, что предупредить заболевание легче, чем его лечить. В связи с этим можно предложить следующие методы обеззараживания рыбы:
— Термическая обработка. Варка рыбы должна продолжаться в течение 12-15 мин. с момента закипания. Жарить рыбу следует не менее 15-20 мин.
— Посол рыбы. При посоле рыбы весом до 2 кг при исходной концентрации 20% соли к весу рыбы от 7 до 14дней.
— Обеззараживание рыбы холодом. Рыба весом до 2 кг считается обезвреженной после следующей длительности выдержки в зависимости от температуры:
— Обезвреживание икры:
При появлении признаков заболеваний или подозрений на гельминтозы, связанные с употреблением рыбы, рекомендовано обратиться к врачу.
Паразиты в рыбе и рыбопродуктах. Паразитологическое исследование
Среди всех классов паразитов, встречающиеся в рыбе и других гидробионтах, опасными для здоровья человека являются только личинки гельминтов:
К наиболее широко распространенным заболеваниям, передающимся через рыбу и другие гидробионы, относятся описторхоз, дифиллоботриозы и эндемичные для Дальнего Востока России метагонимоз, нанофиетоз и клонорхоз (рис. 1).
Поэтому при обнаружении личинок гельминтов следует определить жизнеспособность выявленных плероцеркоидод, метацеркарий, акантел и личинок нематод (рис. 2).
Рисунок 2 – Обнаруженные личинки гельминтов:а – личинки описторхоз; б – плероцеркоиды (личинки) лентеца широкого в икре щуки
1. Отбор проб и подготовка проб к анализу
Для паразитологических исследований пробы берут отдельно от проб на микробиологические и физико-химические анализы. Отбор проб и объем рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки для исследования на соответствие требованиям безопасности для здоровья человека по паразитарным показателям осуществляется в соответствии с требованиями:
Отбор проб сырья (свежей, охлажденной и мороженой рыбы, морских беспозвоночных, молок, икры) и полуфабрикатов. Пробы отбирают в чистую посуду, полиэтиленовые мешки или плотную бумагу. Количество единиц упаковки, подлежащих вскрытию, установлены стандартами, нормативно-методическими документами. Если на продукт отсутствуют стандарты или научно-технические документы, то вскрывают 5 % единиц упаковки от общего их количества в партии [48, 49].
До начала исследования рыбы следует определить видовую принадлежность рыбы (по документам, сопровождающим пробу) и определить, какие виды гельминтов, опасные для здоровья человека, могут в ней находиться, руководствуясь МУК 3.2.988-00 и СанПиН 2.3.2.1078 [23].
Для исследования на наличие метацеркарий Opisthorchis felineus и плероцеркоидов Diphyllobothrium latum целесообразнее отбирать рыб старших возрастов, так как личинки паразитов живут несколько лет, и их число увеличивается с возрастом рыб. Метацеркарий Metorchis bills (albidus) чаще встречается у сеголеток и рыб младших возрастов, а Echinochasmus perfoliatus – преимущественно у мальков.
Хранение и подготовка к исследованию рыбы проводится следующим образом.
2. Гельминтологическое исследование рыбы
При исследовании используют два подхода: выявление личинок, видимых невооружённым глазом (плероцеркоиды, акнтелы, нематоды), и выявление личинок, невидимых вооружённым глазом с использованием оптических средств (трематоды). При этом проводят:
Рисунок 3 – Компрессорий
Метод параллельных разрезов. Самый употребительный метод, позволяющий сравнительно быстро обследовать мясо рыб крупной и средней величины, пригоден для рыб всех видов разделки.
Обследуемую рыбу желательно вначале обесшкурить, чтобы проверить, нет ли под кожей паразитов или поражений. Метод применяется для обнаружения в мышечной ткани рыбы личинок гельминтов, видимых без использования увеличительных приборов (цестод, нематод, скребней). Мышечную ткань острым скальпелем разрезают на пластинки толщиной от 5 до 10 мм, которые затем раздвигают и просматривают в падающем свете невооруженным глазом. Разрезы можно делать как поперек, так и вдоль мышечных волокон.
Делая разрезы мускулатуры и встречая в ее толще крупных личинок или капсулы с личинками (величиной около 1 см и более), нужно извлечь несколько экземпляров паразитов целиком для определения вида. Выделенных личинок помещают в чашку Петри. При исследовании тихоокеанских лососей, кунджи и сахалинского тайменя на наличие плероцеркоидов Diphyllobothrium luxi (D. klebanovskii) разрезы проводят поперек мышечных волокон всей дорсальной части тела, большинство личинок локализуется между жировым и спинным плавниками [47, 48].
Метод исследования мышечной ткани на просвет. Это наиболее эффективный метод, позволяющий быстро обследовать большие количества рыбы и рыбной продукции. Используется для выявления личинок нематод, цестод, скребней. Для использования этого метода нужно иметь специальные приспособления – столик с прозрачной (лучше из молочного или матового стекла) крышкой и подсветкой снизу.
Рыба всех видов разделки перед обследованием должна быть обесшкурена, филе толщиной до 3–4 см просматривается целиком, сначала с одной, а потом с другой стороны. У рыбы других видов разделки мясо срезается с костей так, чтобы получившиеся куски или филейчики достигали в толщину не более 3–4 см. Слишком толстые куски соответствующим образом разрезаются.
Паразиты – личинки цестод, трематод и нематод, паразитические ракообразные и другие включения размером от нескольких миллиметров и более – обычно хорошо заметны на просвет, даже в довольно толстых филейчиках. Обнаруженных личинок гельминтов выделяют из мышечных тканей рыбы с помощью препаровальных игл. Выделенных личинок помещают в чашку Петри и определяют видовую принадлежность гельминта (рис. 4).
Рисунок 4 – Исследование мышечной ткани на просвет
Компрессорный метод. Метод применяется в основном для выявления метацеркарий трематод, им можно пользоваться лишь для выборочного контроля. Чаще всего метацеркарии поселяются в поверхностных слоях мышц на глубине до 2 мм и в подкожной клетчатке. Исследуются очень мелкие, незаметные или малозаметные невооруженным глазом объекты, поэтому для их обнаружения и дифференциации видовой принадлежности необходимы специальные микроскопические исследования. Используют метод при просмотре мышечной ткани и внутренних органов рыб, а также мышечной ткани ракообразных. Метод заключается в просмотре на просвет сдавленных между двух стекол кусочков мышечной ткани.
При компрессорном исследовании скальпелем удаляют чешую с одного бока под спинным плавником рыбы, затем надрезают кожу в двух направлениях. Первый разрез делают впереди спинного плавника перпендикулярно продольной оси тела до боковой линии, второй – от конца первого надреза по направлению к хвостовому плавнику вдоль боковой линии. Пинцетом поднимают край кожи и отпрепаровывают ее на площадки до 25 см 2 так, чтобы подкожная клетчатка осталась на поверхности мышц. После этого срезают поверхностный слой мышц толщиной 0,2–0,5 см, нарезают мелкими кусочками и размещают по всей поверхности нижнего стекла компрессора, покрывают верхним стеклом и сжимают винтами [48].
Просмотр осуществляется невооруженным глазом или при слабом увеличении бинокуляра микроскопа. Удобнее всего использовать кусочки мышечной ткани объемом около 2–5 см 3 и стекла размером около 9×20 см. Стекла должны быть толстыми, не менее 4–5 мм. Под малым увеличением микроскопа или под трихинеллоскопом просматривают все кусочки, взятые от одной рыбы. Личинки легко обнаруживаются (рис. 5).
Рисунок 5 – Компрессорный метод исследования
Обследование печени, молок и икры. Печень, молоки и икра обследуются отдельно от других частей рыбы. Вначале проводится внешний осмотр печени или ястыков. Снаружи, чаще всего на покрывающих их пленках или под ними, могут быть инкапсулированные личинки цестод и нематод. Особое внимание нужно обращать на личинок нематод, свернутых в плоские спирали; диаметр таких спиралей может составлять 2–6 мм.
Затем пленки надрезаются или разрываются, небольшие порции молок, икры или ткани печени помещаются на стекло и просматриваются компрессорным методом. При этом могут быть встречены личинки нематод или взрослые трематоды, хорошо видимые визуально, а также другие паразиты или включения [47, 49].
Компрессорным методом удобно просматривать лишь мелкую икру. Порции более крупной икры приходится разбирать препаровальными иглами в чашке Петри с небольшим добавлением воды. Замеченные паразиты или включения, а также имеющие необычный вид икринки, отбираются глазным пинцетом для последующего определения. Отбираются также участки тканей, имеющие ненормальный вид или консистенцию.
3. Жизнеспособность метацеркариев
Определяют следующим образом. Их изолируют от ткани, помещают в каплю физиологического раствора на предметном стекле, покрывают покровным и микроскопируют вначале под малым, а затем большим увеличением микроскопа. У погибших метацеркариев нарушена целостность оболочки, содержимое в состоянии зернистого распада, экскреторный пузырь разрушен, присоски слабо выражены. Живые метацеркарии в цисте подвижны. Подвижность вызывают механическим воздействием или подогреванием личинки (не выше плюс 40 °С).
Неподвижность личинки не свидетельствует о ее гибели. При исследовании свежевыловленной рыбы, а также при комнатной температуре, живые личинки бывают неподвижными. Поэтому исследуют большое количество личинок с применением тепла, а также учитывают степень выраженности присосок и экскреторного пузыря.
4. Критерии оценки условно годной и не пригодной в пищу рыбной продукции
Рыба и продукты её переработки, в которых не обнаружено живых личинок гельминтов, опасных для человека и животных, подлежат сертификации и реализации в установленном порядке. При обнаружении живых личинок гельминтов, опасных для человека и животных, рыба не допускается в реализацию и подлежит обезвреживанию.
В разряд «условно годная» переводят рыбную продукцию, в пробе которой обнаружена хотя бы одна живая личинка гельминтов. Рыбная продукция, переведённая в разряд «непригодная», направляется на утилизацию с составлением акта в установленном порядке. Режимы обработки «условно годной» рыбной продукции отражены в СанПиН 3.2.1333-03 «Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации». После обеззараживания проводят дополнительные санитарно-паразитологические исследования [24].
5. Паразитологические методы исследования рыбы и рыбных продуктов
Исследование проводят в следующем порядке: кожа, плавники, ротовая полость, жабры, глаза, кровь, сердце, брюшная полость (печень, селезенка, плавательный пузырь, мочевой пузырь, желчный пузырь, почки, половые железы, кишечник), мышцы, головной и спинной мозг.
Для обнаружения трипаносом и криптобий у рыбы берут кровь из сердца и делают мазки. Для предотвращения свертывания крови добавляют 1 %-й раствор лимоннокислого натрия, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Чтобы мазок не высыхал, края покровного стекла смазывают вазелином. Одновременно несколько мазков крови высушивают на воздухе, фиксируют в метиловом спирте, окрашивают по Романовскому-Гимзе или гематоксилином и микроскопируют [47, 48, 49].
Раствор метиленовой сини перед употреблением разводят дистиллированной водой 1:10 и окрашивают мазки 30 с, затем промывают водой и дифференцируют в течение нескольких секунд 5–10 %-м раствором танина. Эритроциты окрашивают в красноватофиолетовый цвет, плазма простейших кровепаразитов – в яркоголубой, ядра лейкоцитов – в фиолетовый (рис. 6).
Рисунок 6 – Мазок крови рыб
Для изучения морфологии паразитических инфузорий их окрашивают железным гематоксилином по Гейденгайну, а также гематоксицилином Делафильда или квасцовыми кармином.
Паразитических жгутиконосцев окрашивают железным гематоксилином или по Романовскому-Гимзе (рис. 7).
Рисунок 7 – Паразитические жгутиконосцы
Слизистых споров окрашивают 1 %-м водным раствором метиленового синего 30–60 мин, затем препарат промывают в воде, последовательно проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96 %-й и абсолютный) и просветляют ксилолом.
Трематод и цестод окрашивают квасцовым кармином. Фиксированные в спирте препараты промывают в течение нескольких часов в проточной или часто сменяемой воде и помещают в краску от 1 мин до нескольких часов (в зависимости от толщины гельминта). Продолжительность окраски можно контролировать микроскопией препаратов.
Окрашенные препараты переносят в дистиллированную воду, где в течение нескольких минут их тщательно отмывают от краски. Отмытых паразитов осторожно сушат фильтрованной бумагой и проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96 %-м), выдерживая в них несколько часов. Обезвоженных паразитов просветляют маслом и ксилолом.
Мелких цестод можно окрашивать молочнокислым кармином по Блажину. Молочную кислоту разводят в 2 раза дистиллированной водой, добавляют небольшое количество кармина (в зависимости от желаемой степени окраски). Жидкость кипятят. Красить лучше свежие, нефиксированные объекты. Продолжительность окраски контролируют под микроскопом, а в случае перекрашивания объект переносят в цельную молочную кислоту для обесцвечивания. Окрашенный препарат промывают 20–60 мин водопроводной водой и помещают в бальзам (рис. 8).
Рисунок 8 – Сосальщики (трематоды)
При окраске крупных цестод этот способ модифицировали. Цестод промывают в проточной или часто сменяемой водопроводной воде при комнатной температуре летом один день, в холодное время года – 3–4 дня. Затем их помещают на 4–6 ч в краску (0,3 г кармина на 100 мл 30 %-й молочной кислоты).
Интенсивность прокрашивания контролируют под микроскопом. После этого на сутки их переносят в дистиллированную воду, в которую добавляют 3 капли раствора сернокислого железа и 2 капли 1 %-го раствора фенола.
Далее цестод переносят на чистое предметное стекло, расправляют и высушивают при температуре плюс 30–37 °С. Высохший, очень плотно приставший к стеклу препарат заливают канадским бальзамом или канифолью, растворенной в смеси, состоящей из равных частей хлороформа и абсолютного спирта [47].
Постоянные препараты для микроскопического исследования нематод готовят следующим образом. Фиксированных в 70 %-м спирте живых гельминтов через сутки помещают на несколько часов (в зависимости от величины нематод) в 96 %-й, а затем в абсолютный спирт на 3–5 мин. После этого их переносят в гвоздичное или хеноподиевое масло или карбоксилол на 2–5 мин, а затем кладут на чистое предметное стекло и заливают бальзамом (рис. 9).
Рисунок 9 – Нематоды
Скребней (акантоцефалов) для изучения хоботка и крючков просветляют. Для этого их из 70 %-го спирта переносят сначала в 50 %-й глицерин, а затем в чистый. Структуру других органов изучают после полного обезвоживания гельминтов путем постепенного проведения их через спирты возрастающей крепости. Из абсолютного спирта гельминтов переносят на предметное стекло в каплю кедрового масла, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.
Паразитических рачков исследуют в той же жидкости, в которой хранят. Красить их не обязательно. Иногда прибегают к окраске борным кармином, эозином, сафранином и др.
