мясо пептонный агар состав среды
АГАР МЯСО-ПЕПТОННЫЙ
Агар мясо-пептонный — плотная или полужидкая универсальная питательная среда, состоящая из мясо-пептонного бульона с добавлением 0,5—2% агара и применяемая для выращивания большинства патогенных микробов.
Основой для приготовления Агара мясо-пептонного является мясная вода, к которой прибавляют 1 % порошкообразного пептона и 0,5% поваренной соли и растворяют при подогревании. Для полного осаждения белков жидкость кипятят, постоянно помешивая, в течение 30 мин. или выдерживают около 20 мин. в автоклаве при t 115 градусов. После этого фильтруют через 3—4 слоя фильтровальной бумаги, предварительно смоченной дистиллированной водой, устанавливают реакцию среды (pH не ниже 8,2—8,4) и добавляют 0,5—2% (в зависимости от необходимой степени плотности среды) размельченного и промытого агара (см.), после чего жидкость нагревают, медленно помешивая, до полного растворения агара. При упаривании добавляют горячую дистиллированную воду до первоначального объема.
После растворения агара проверяют реакцию среды, окончательно устанавливают требуемую величину pH (обычно 7,2—7,3) и, если необходимо, фильтруют в горячем состоянии через ватно-марлевый фильтр. Фильтрат разливают в пробирки, флаконы, колбы или матрасы и стерилизуют в автоклаве при 120° в течение 20—30 мин. После стерилизации среда, остывая, уплотняется.
Источником азота являются органические соединения, находящиеся в мясной воде, и некоторые продукты протеолиза белков — пептоны, представляющие собой смесь полипептидов (зачастую довольно сложных), дипептидов и различных аминокислот.
Агар мясо-пептонный содержит около 0,4 % общего азота, 0,07% аминного азота, 4,6% сухого остатка, 1,4% зольных элементов и 0,85% хлоридов.
Агар мясо-пептонный с добавлением определенных компонентов (крови, сыворотки, яичного желтка и т. п.) употребляется для культивирования некоторых патогенных микроорганизмов, плохо растущих или совсем не растущих на обычных питательных средах.
Библиография: Козлов Ю. А. Питательные среды в медицинской микробиологии, с. 62, М., 1950: Руководство но микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, М., 1973; Тимаков В. Д. и Гольдфарб Д. М. Основы экспериментальной медицинской бактериологии, с. 180, М., 1958.
Мясопептонного агар
Мясопептонного агар (МПА) — самое распространенное универсальное питательную среду в микробиологических исследованиях.
Состав
Описание
Препарат представляет собой плотное питательную среду желтого цвета.
Выпускается в виде плотной питательной среды по 300 мл в стеклянных флаконах, откупоренных пробками завальцованы алюминиевыми колпаками.
Назначение
Используется для культивирования и изучения культуральных свойств различных микроорганизмов.
Возможно использование препарата как питательной основы для приготовления различных питательных сред целевого назначения.
Хранение
Срок годности — 2 года. Сохраняется среда герметично закрытым при температуре от 2 до 25 ° C в местах, защищенных от воздействия прямых солнечных лучей.
Приготовление
Существует и другой вариант среды — мясо-пептона желатина (МПЖ), где вместо агара для затвердевания среды используют желатин. В 1 л бульона мясопептонного добавляют 100-150 г желатина. Температура плавления зависит от процентного содержания в среде. 10% желатина плавится при 24 ° С, 15% — при 25 °. В летнее время среды готовят, добавляя 15% желатины. После растворения желатина при осторожном нагревании в среде устанавливают слабощелочную реакцию (как и для МПБ и МПА), кипятят в течение 5 мин, затем охлаждают-до 40-50 ° С Одновременно яичный белок взбивают с небольшим количеством воды, вливают его в охлажденную желатиновую среду, хорошо взбалтывают и снова нагревают. Среда после выпадения белков становится прозрачным. Его фильтруют через горячую воронку, разливают в пробирки и стерилизуют в кипятильнике Коха текучим паром, прогревая среду по 30 мин через 24 ч три раза.
Приготовление мясо-пептонного агара
К 100 мл мясного бульона добавляют 1 % пептона Пептон- это продукт ферментативного гидролиза белков. Добавляют пептон в среду для увеличения ее питательности, для уплотнения среды в нее добавляют от 2 до 4 % агар-агара
Питательная среда д.б. слабокислой по отношению к цитоплазме микроорганизмов, которые будут выращиваться в ней. Для этого в среду добавляют 0,5% поваренной соли. Реакция среды от 7,0 до 7,4. После введения агар-агара смесь прогревают до неполного студнеобразования.
Приготовление мясо-пептонногожелатина.
Дня изучения биохимических признаков микроорганизмов пользуются дифференциально-фагностическими средами. Примером таких сред могут служить среды Гисса. Их применяют для изучения способности м.о. ферментировать углеводы.
ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ:
Приготовить 100 мл МПА:
2. В колбу наливают 100 мл МБ. Взвешивают 2 г. пептона. 0,5 г. агар-агара. Все это помещают в колбу с мясным бульоном.
3. Колбу ставят в кастрюлю с горячей водой и содержимое колбы подогревают до тех пор пока полностью не расплавится агар-агар и среда не станет однородной. Затем добавляют соды (до слабощелочной реакции по лакмусу).
4. Расплавленную среду разливают в пробирки по 10 мл.
5. Готовят ватные пробирки, обтягивают их марлей и закрывают пробки с приготовленной питательной средой.
6. Пробирки с МПА помещают в корзины. Сдают лаборанту для стерилизации.
Классификация питательных сред
По составу питательную среду подразделяют на 2 группы: натуральные среды неопределенного состава и синтетические среды.
Натуральными обычно называют среды, которые состоят из продуктов животного или растительного происхождения, имеющих сложный неопределенный хим. состав. Основой таких сред являются различные части зеленых растений, животные ткани. солод, дрожжи, фрукты, овощи. Большинство из них используется в виде экстрактов или настоев. Однако среды с неопределенным составом малопригодны для изучения физиологии обмена веществ микроорганизмов, поскольку они не позволяют учесть потребление ряда компонентов среды, а с другой стороны выявить, какие вещества образуются по ходу развития м.о. Это связано с тем, что состав натуральных питательных сред очень сложен, кроме того он не является постоянным. Натуральные среды неопределенного состава используются главным образом для поддержания культур микроорганизмов, накопления их биомассы и диагностических целей. К числу сред неопределенного состава относят и так называемые среды «полусинтетические». В их состав наряду с известными хим. соединениями входят вещества неопределенного состава Такие среды находят широкое применение в пром. микробиологии для получения аминокислот, витаминов и антибиотиков. В качестве примера таких сред можно назвать: мясопептонная среда, в состав которой одновременно с мясным экстрактом и пептоном входит поваренная соль, фосфорнокислый каши, иногда глюкоза или сахароза, картофельные среды с глюкозой или пептоном.
По назначению : различают элективные и дифференциально-диагностические среды
Элективные среды обеспечивают развитие преимущественно одного вида м.о. или группы родственных микроорганизмов (менее пригодны или совсем не пригодны для развития других). Такие среды применяют главным образом для выделения.
Микроорганизмов из мест их естественного обитания, для получения накопительных культур.
Дифференциально-диагностические среды: это такие среды, которые позволяют по возможности очень быстро отличить (дифференцировать) одни виды м.о. от других. Их состав подбирается с таким расчётом, чтобы он позволил чётко выявить наиболее характерные свойства данного вида м.о. Нередко это достигается введением в среды специальных красителей-индикаторов.
По физическому состоянию среды разделяют на жидкие, плотные и сыпучие. Для выяснения физиолого-биохимических особенностей микроорганизмов, а также для накопления их биомассы или продуктов обмена наиболее удобно применять жидкие среды. Плотные среды используют для выделения чистых культур. В промышленной биологии применяют так называемые сыпучие среды. К ним относятся разваренное пшено, пропитанное питательным раствором.
Вопросы для самоконтроля:
1. Что принято считать питательными средами?
2. Как классифицируют их по агрегатному состоянию?
3. Как делятся питательные среды по назначению? В каких случаях удобнее применять те или иные среды?
4. Какие среды называют дифференциально-диагностическими?
5. Как готовят питательные среды? Какие студнеобразователи чаще всего применяют?
6. Что входит в состав МПА? Как его готовят?
7. Чем отличается МПА от МПЖ?
1. Оформление отчета по лабораторному занятию.
2. Подготовиться к защите лабораторного занятия.
Мясо пептонный агар состав среды
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
БУЛЬОН МЯСО-ПЕПТОННЫЙ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)
Nutrient media. Meat-pepton broth (for veterinary). Specifications*
* Наименование стандарта. Измененная редакция, Изм. N 1.
Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. N 899 срок действия установлен с 01.01.1976 г. до 01.01.1981 г.*
ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 1975 г.
Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 11, 1989 год
Настоящий стандарт распространяется на мясо-пептонный бульон, представляющий собой питательный раствор, предназначенный для выращивания микроорганизмов.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Мясопептонный бульон должен изготавливаться в соответствии с действующим технологическим регламентом из мясной воды по ГОСТ 20729-75 с добавлением 1% пептона и 0,5% хлорида натрия в разведениях 1:1, 1:2 и 1:4.
1.2. Мясо-пептонный бульон по физико-химическим, биохимическим и биологическим показателям должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.
Норма для разведений
Специфический, свежего мясного экстракта и пептона
Наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка
Массовая доля общего азота, %, не менее
Массовая доля азота, аминогрупп, аминокислот и низших пептидов, %, не менее
Массовая доля пептонов, %, не менее
Массовая доля сухого вещества, %, не менее
Массовая доля белка, %, не более
Массовая доля хлористого натрия, %
Концентрация водородных ионов (рН)
Посев на питательные среды не должен давать роста микрофлоры в течение 3 сут в термостате при 37-38 °С
Способность поддерживать рост микробов, оптическая плотность, не менее, для
Staphylococcus aureus «Лоссманов»
Escherichia coli штамм 675
Streptococcus faecalis штамм 6783
1.1, 1.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ
2.1. Мясо-пептонный бульон сдают и принимают сериями.
2.2. Каждая серия мясо-пептонного бульона на предприятиях биологической промышленности Министерства сельского хозяйства СССР должна быть принята государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
2.3. Под серией следует понимать любое количество мясо-пептонного бульона, изготовленное за один технологический цикл, в одной емкости (реакторе) и оформленное одним документом о качестве.
Если вся серия мясо-пептонного бульона расфасована в бутыли, делают выборку в количестве одной бутыли. Если мясо-пептонный бульон расфасован во флаконы, составляют выборку такого количества флаконов, чтобы объем мясо-пептонного бульона в отобранных флаконах соответствовал указанной выше норме, которая установлена в зависимости от общего объема серии мясо-пептонного бульона.
2.5. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей серию мясо-пептонного бульона считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта.
2.6. Контрольную проверку образцов по требованию потребителя проводит Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ
3.1. Методы отбора проб
3.1.1. Пробу мясо-пептонного бульона в количестве 2 или 0,6 л (в зависимости от объема серии препарата) отбирают из реактора или бутыли стерильно.
Пробу, отобранную от серии мясо-пептонного бульона объемом менее 50 л, в архиве не оставляют.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.2. Внешний вид, цвет, наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка устанавливают, просматривая флаконы и бутыли с мясо-пептонным бульоном в проходящем свете, для чего флаконы встряхивают, переворачивая вниз пробками, а бутыли покачивают.
3.3. Запах мясо-пептонного бульона определяют в пробе органолептически.
3.4. Определение содержания общего азота
3.4.1. Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
колбу Кьельдаля вместимостью 50-100 см по ГОСТ 25336-82;
элемент нагрева (плитку, горелку);
пипетки на 1, 2, 5 см по ГОСТ 20292-74;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
кислоту серную по ГОСТ 4204-77, концентрированную и 0,1 н раствор;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77, 30-33%-ный и 0,1 н растворы, приготовленные на предварительно прокипяченной дистиллированной воде;
перекись водорода по ГОСТ 10929-76;
спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67;
метиловый оранжевый, 0,1%-ный раствор.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.4.2. Проведение испытания
После охлаждения содержимое колбы переносят в колбу для отгона, добавляя 10-12 см дистиллированной воды. Полноту переноса проверяют по индикатору метиловому оранжевому. Последняя порция смывных вод должна остаться желтой.
В приемную колбу аппарата Кьельдаля наливают 20 см 0,1 н раствора серной кислоты и 2 капли индикатора Таширо. Индикатор Таширо готовят, растворяя 0,4 г метилового красного и 0,2 г метиленовой сини в 200 см 96%-ного этилового спирта.
Отгонную колбу присоединяют к холодильнику и парообразователю. Содержимое отгонной колбы нейтрализуют 30-33%-ным раствором гидрата окиси натрия по индикатору метиловому оранжевому. Отгон производят до тех пор, пока в приемной колбе соберется около 70 см раствора.
Содержимое приемной колбы титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия до перехода окраски раствора от лилового к зеленому.
Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона в колбу для минерализации берут 1 см дистиллированной воды.
3.4.3. Обработка результатов
Содержание общего азота в мясо-пептонном бульоне ( ) в процентах вычисляют по формуле
,
— поправочный коэффициент к титру 0,1 н серной кислоты;
— количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, или в контрольном опыте, см ;
— поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора гидрата окиси натрия;
— количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, см ;
Мясо пептонный агар состав среды
Рецепт 61. Мясопептонный агар. МПА применяют для выращивания неприхотливых микроорганизмов и как основу специальных сред для культивирования более требовательных микробов (сывороточного, кровяного, асцитического агара и др.)
Пептон — 10,0-20,0 г
Натрия хлорид — 5,0 г
Агар — 10,0-20,0 г
Вода мясная — 1000 мл
Смесь пептона, хлорида натрия и мясной воды кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения ингредиентов. Бульон фильтруют, устанавливают pH и добавляют измельченный агар (в зависимости от качества агара и назначения среды). Затем среду кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара. При помутнении среды ее просветляют одним из известных способов. Приготовленную среду разливают в пробирки или во флаконы, стерилизуют в автоклаве при 121 °С в течение 20 мин.
Рецепт 62. Питательный бульон (HiMedia, Nutrient Broth, Cat. M002):
Пептон — 5,0 г
Натрия хлорид (NaCl) — 5,0 г
Экстракт говяжий — 1,5 г
Экстракт дрожжевой — 1,5 г
pH 7,4(±0,2)
Суспендируют 13 г сухой смеси в 1000 мл дистиллированной воды. Кипятят до полного растворения внесенных ингредиентов. Стерилизуют при 121 °С в течение 15 мин.
Среду используют для выращивания неприхотливых микробов. Добавление крови, сыворотки и других ингредиентов делает ее пригодной для роста требовательных микроорганизмов.
Рецепт 63. Питательный бульон (HiMedia, Nutrient agar, Cat. M001). Питательный агар рекомендуют использовать для выращивания широкого спектра микроорганизмов, не требующих специальных питательных добавок.
Пептон — 5,0 г
Натрия хлорид — 5,0 г
Экстракт говяжий — 1,5 г
Экстракт дрожжевой — 1,5 г
Агар — 15,0 г
pH 7,4 (±0,2)
Суспендируют 28 г сухой смеси в 1000 мл дистиллированной воды. Кипятят при постоянном помешивании до полного растворения внесенных ингредиентов. Стерилизуют при 121 °С в течение 15 мин.
Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 13.09.2019